主权项 |
1.一种异种骨胶原基质制备的新方法,其特征在于:采用一系列生物和化学方法对牛、猪等异种骨进行处理,过程如下:(1)异种骨材料的来源和加工选取新鲜的牛或猪的腿骨,经充分去除软组织、软骨和骨髓后,洗净,冷冻,切割分离干骺端,将骨骺端松质骨加工成块状,其长轴与骨小梁的排列方向保持一致,骨干中部加工成圆柱体或条形;(2)脱脂处理加工好的骨块用40~60℃压力水反复冲洗,然后用0.01~5mol/L碱液室温浸泡24h,将骨块用脱脂剂于50~60℃下脱脂48~72h,每24h将骨块取出在离心机上以4000转/分钟的速度离心30分钟左右,清除骨块内细胞成分和脂肪等物质;(3)部分脱钙处理骨块在0.1~5mol/L酸性溶液中室温下部分脱钙5~10分钟,再用双蒸水反复透析至pH值为6,以去除残留的酸液;(4)脱非胶原蛋白骨块放入含有pH值为7.4的非胶原蛋白脱除剂的混合液中,该混合液的组成为含氮碱性有机物、Tris缓冲液和盐类,置于4℃的冰箱中脱除非胶原蛋白,时间为24h;(5)蛋白酶消化骨块用0.05~0.5%的蛋白酶消化,加入少量巯基酶抑制剂防腐,用缓冲溶液控制溶液的pH为7.8~8.0,骨液比为1∶1~1∶6,在37℃条件下消化48h,再用4mol/LNaCl浸泡12~24h,以脱除溶解的非胶原蛋白和部分胶原蛋白;(6)消毒和包装 |