一种检测鲤科鱼类卵黄蛋白原试剂盒的制备方法

摘要

本发明公开了一种检测鲤科鱼类卵黄蛋白原试剂盒的制备方法，首先是卵黄蛋白原的诱导和分离纯化，配制乙炔基雌二醇溶液，腹腔注射入鱼体，诱导一段时间，取鱼血，离心获得血清，用离子交换柱分离纯化，透析脱盐，制备冻干粉；其次是卵黄蛋白原多克隆抗体的制备，称取冻干粉，溶于双蒸水中，加入弗氏佐剂乳化，免疫大白兔，制备多克隆抗体。本发明可灵敏、准确、方便的定量检测多种鲤科鱼类血液中、肝组织及鱼体中的卵黄蛋白原。

主权项

1、一种检测鲤科鱼类卵黄蛋白原试剂盒的制备方法，包括下列步骤：A、卵黄蛋白原标准样品的诱导和分离纯化：①配制17α-乙炔基雌二醇溶液，将100mg1 7α-乙炔基雌二醇先溶于5mL丙酮，再转溶于10mL豆油中，丙酮用氮气吹干；②腹腔注射入鱼体，剂量为5mg/kg，暴露5-7天，取鱼血，4℃离心获得血清；③血清通过离子交换层析柱，填料为DEAE Sepharose CL-6B，层析柱用0.025mol/L Tris-HCl，pH7.5缓冲液平衡，加入2mL血清样品，用含NaCL的0.025mol/L Tris-HCl，pH7.5缓冲液进行梯度洗脱；④收集含卵黄蛋白原蛋白的洗脱液，透析脱盐后，冷冻干燥为冻干粉；B、卵黄蛋白原多克隆抗体的制备：①称取1mg卵黄蛋白原的蛋白冻干粉，溶于1mL双蒸水中，加入1mL弗氏完全佐剂，乳化后，在大白兔背部皮内注射，进行初次免疫；②第28、42、56天各加强免疫一次，免疫剂量同第一次，采用弗氏不完全佐剂乳化抗原溶液，并在大白兔背部皮下注射，加强免疫；③65天后，从兔耳缘静脉抽取少量血液测量抗体的滴度；④从兔颈动脉放血，制备卵黄蛋白原的抗血清。