用于测序的改变的热稳定DNA聚合酶

摘要

提供了掺入非常规核苷酸例如用荧光素族染料标记的核苷酸的效率增强的修饰的热稳定的DNA聚合酶。这种修饰的热稳定的DNA聚合酶是采用重组DNA技术制备的。所述聚合酶特别适用于链终止核酸测序方法。还提供了编码本发明重组热稳定聚合酶的核酸以及含有所述核酸的载体和宿主细胞。也提供了含有本发明重组热稳定聚合酶的试剂盒。本发明的聚合酶和方法在对DNA测序具有成本显著降低和效率提高的优点。

主权项

1．重组的热稳定DNA聚合酶，其特征在于：a)所述聚合酶的天然形式包括氨基酸序列LeuSerXaaXaaLeuXaaXaaProXaaXaaGlu(SEQ ID NO:1)，其中在该序列的3,4,6,9和10位的“Xaa”是任何的氨基酸残基，和在该序列的第7位的“Xaa”是Val和Ile。b)与所述天然序列相比，第4位所述的“Xaa”被突变，但第4位的“Xaa”不突变为Glu；和c)与所述聚合酶的天然形式相比，所述热稳定聚合酶降低了对掺入荧光素族染料标记的核苷酸的辨别力大小。