人卵巢癌永生化细胞株的建立

摘要

本发明公开了一种人卵巢癌永生化细胞株的建立方法和依照该方法建立的人卵巢肉瘤样癌永生化细胞株,属于微生物动物细胞株领域。人卵巢癌永生化细胞株的建立方法是将永生化基因——SV40 T抗原基因导入人卵巢癌原代细胞,经筛选,抗性克隆扩大培养,得到永生化细胞株。依照该方法建立的人卵巢肉瘤样癌细胞株命名为BUPH:OVSC－2,由微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)保藏,保藏号为NO.0606,其生物学特征在于:侵袭力强,细胞呈现为梭形肉瘤细胞形态,为上皮来源,异型性明显,保留其原始细胞的生物学特性。本发明的建系方法和建立的BUPH:OVSC－2细胞株,可用于研究人卵巢癌的病因学、转移机制、耐药机理、新药筛选等。

主权项

1.人卵巢癌永生化细胞株的建立，其特征在于步骤如下：(1)利用基因重组技术将pSV3neo中的SV40 T抗原(含大T和小T抗原)基因片段克隆入高效表达克核载体质粒pcD2中，构建成pcD2-SV40，重组质粒经酶切鉴定；(2)用终浓度200U/ml胶原酶I和100U/ml透明质酸酶消化卵巢癌组织标本，消化产物经45％和20％Percoll溶液进行密度梯度离心，以培养基MCDB105∶M1991∶1添加15％胎牛血清、0.2U/ml胰岛素、2mmol/ml L-谷氨酰胺培养，675U/ml胶原酶I消化细胞进行传代；(3)挑选生长状态良好、80％汇合的早期传代细胞以脂质体Lipofectin2000为载体转染质粒pcD2-SV40，转染后细胞经G418筛选，抗性克隆扩大培养，及SV40T基因在转染细胞中表达的鉴定，由此获得能在体外长期稳定生长和传代的卵巢癌细胞株。