猪血中提纯杀菌性/通透性增加蛋白的方法

摘要

本发明涉及一种从猪血中提取纯化杀菌性／通透性增加蛋白（简称ＢＰＩ）的方法。该法为首先将猪血中纯化的ＰＭＮＬ采用冷冻法制取ＢＰＩ粗提液；再以大肠杆菌作为结合菌进行孵育、离心得到结合菌体；然后从结合菌体中分离出蛋白质；最后进行透析，离心得纯化ＢＰＩ。该法采用的设备简单，条件易控制，耗时短，污染度低，成本低，而且该法获得的ＢＰＩ经测试其纯化倍数及纯度已能满足临床需求，为其临床应用奠定了基础。$#!

主权项

权利要求书1．一种猪血中提纯杀菌性／通透性增加蛋白的方法，其特征在于：首先将猪血中纯化的PMNL进行冷冻，反复冻融三次或三次以上，并用0.16N硫酸抽提得PH为4.0的BPI粗提液；再以大肠杆菌作为结合菌进行孵育、离心即将大肠杆菌J5菌置于PH4.0的BPI粗提液中，使J5菌终浓度为5×108cfu／ml，在37℃条件下孵育10-15min，离心收集得到结合菌体；然后将所得结合菌体置于PH4.0的200mMMgCl2／10mMHAc／NaAc缓冲液中，使结合菌体终浓度为5×109cfu／ml，37℃振荡孵育15min，在4℃，23000×g条件下离心20min，取上清，该上清为分离出的蛋白质；最后将2000倍于上清体积的10mMHAc／NaAcPH4.0缓冲液中透析24小时，在4℃，23000×g条件下离心20min得纯化的BPI。