摘要 |
本发明涉及一系列通用型腺病毒伴随病毒(adeno-associated virus,AAV)载体的构建,这些载体包括pWAV-1、pWAV-2、pSNAV-1和pSNAV-2。其共同特征是每种载体均提供2型AAV两端的ITR、巨细胞病毒(CMV)立早增强子和启动子、多克隆位点和poly A信号。本发明提供了用上述通用型AAV载体构建携带外源基因的AAV载体质粒的方法。含有外源基因的AAV载体质粒既可用于产生重组AAV,又可直接作为真核表达质粒使用。pSNAV-1和pSNAV-2除具有上述共同特征外,还含有新霉素抗性基因表达盒。本发明利用这一特征,提供了用含有外源基因的pSNAV-1或pSNAV-2质粒建立稳定携带AAV载体的细胞株的方法。本发明进一步提供了“一株载体细胞/一株辅助病毒”的重组AAV生产方法,即用我们先前发明的一种用于重组AAV大规模生产的全功能辅助病毒(已申报专利,申请号98120033.8)感染AAV载体细胞株,实现重组AAV的大规模生产。 |