一种罗丹明B完全抗原的合成方法

摘要

一种罗丹明B完全抗原的合成方法，属于生物化工技术领域。本发明以罗丹明B为半抗原，用混合酸酐法将其与载体蛋白BSA偶联，用分光光度法测定偶联物的偶联比。本发明成功合成了罗丹明B完全抗原，合成步骤简洁，有效，完全可用于免疫分析中，为以后人们的研究提供了必需的人工抗原，可以满足国内对其研究的需要。

主权项

1、一种罗丹明B完全抗原的合成方法，其特征是以罗丹明B为半抗原，用混合酸酐法将其与载体蛋白BSA偶联，用分光光度法测定偶联物的偶联比；步骤为：(1)罗丹明B完全抗原的合成：配制A液：20mg罗丹明B溶于1mL DMF中，全溶后冰浴下加10μL三丁氨混匀后再加10μL氯甲酸异丁酯磁力搅拌1h；配制B液：40mg BSA溶于3mLpH 7.4的磷酸盐缓冲液中，4℃保存备用；冰浴下将A液逐滴加入B液中，然后置4℃下温孵3h，即得罗丹明B完全抗原混合液；透析袋前处理：取10cm的透析袋，于沸水中煮沸5min，再用60℃的去离子水冲洗3min，保存在4℃去离子水中备用；透析：将罗丹明B完全抗原混合液移入透析袋中，用2×2L的0.01M的pH7.4的磷酸盐缓冲溶液和2×2L的去离子水透析3天，最后使用冻干法将透析袋中的液体制成粉末，即得到罗丹明B完全抗原；(2)罗丹明B完全抗原的鉴定：罗丹明B完全抗原采用分光光度法鉴定其偶联结果，利用牛血清蛋白标准液得到标准曲线，从曲线上比对得到抗原溶液的蛋白浓度，计算摩尔吸光系数ε，再测定罗丹明B完全抗原的偶联比。