人呼吸道合胞病毒荧光定量PCR试剂盒及其检测方法

摘要

本发明公开了一种人呼吸道合胞病毒(Human Respiratory Syncytial Virus，HRSV)荧光定量PCR试剂盒及其检测方法，该试剂盒包括RNA提取液、逆转录酶、RNA酶抑制剂、逆转录反应液、标准阳性模板、Taq DNA聚合酶、荧光定量反应液和标准阴性参控液。利用该试剂盒，首先提取待测样品中病毒总RNA，逆转录成cDNA，然后与标准阳性模板一起作荧光定量PCR，根据荧光定量PCR仪器所带的软件计算出待测样品中呼吸道合胞病毒的起始浓度。本发明检测速度快，操作方便安全，省时效率高，可有效的对婴幼儿及成人病毒性呼吸道感染患者进行病毒RNA的检测，从而达到了早期诊断和有效预防呼吸道合胞病毒感染。

主权项

权利要求书1、一种人呼吸道合胞病毒荧光定量PCR试剂盒，其特征是该试剂盒包括：(a)RNA提取液；(b)逆转录酶M-MLV，使用浓度为10-1000U每个反应体系；(c)RNA酶抑制剂，使用浓度为10-100U每个反应体系；(d)逆转录反应液，使用的引物P1为：5’TTAGCAAAGTCAAGTTGAATGAT 3’，使用浓度为0.1-10umol/L；RT 5×buffer溶液；dNTPs溶液，使用的浓度为0.1-10mmol/L；无菌双蒸水；(e)标准阳性模板，含有人呼吸道合胞病毒核衣壳N蛋白基因3’端195个碱基片段SEQ ID NO.1与PGEM-T Easy载体构成的PGEMT195重组质粒SEQ IDNO.2；(f)Hotstart Taq DNA聚合酶，使用浓度为1-10U每个反应体系；(g)荧光定量PCR反应液，引物P1为：5’TTAGCAAAGTCAAGTTGAATGAT 3’，使用浓度为0.1-10umol/L；引物P2为：5’ACATACCTATTAACCCAGTGAAT3’，使用浓度为0.1-10umol/L；荧光探针FP为5’FAM-TCATCCAGCAAAT(TAMRA)ACACCATCCAACG 3’，使用浓度为0.01-10umol/L，PCR 10×buffer溶液，dNTPs溶液，使用的浓度为0.1-10mmol/L，MgCl2的使用浓度为0.1-10mmol/L；(h)标准阴性参控液，即无模板荧光定量反应液，由(f)和(g)组成。