重组人二连体干细胞因子及其制备

摘要

本发明属于生物技术中的基因工程制备多肽药物技术领域。其目的是构建一种新型融合型二连体干细胞因子基因，并在昆虫细胞中高效分泌表达和制备生物活性更高副作用更小的重组人二连体干细胞因子(rhdSCF)。rhdSCF基因为依次含有人SCF第1－165位氨基酸密码子，12个氨基酸连接肽和人SCF第1－145位密码子及终止密码的DNA片段。从Sf9细胞贴壁或悬浮培养液中制备的rhdSCF精品比活为2.8－2.9×10⁶单位/毫克。比E.coli生产的单体rhSCF精品比活高约6倍。它可用于放疗、化疗及骨髓移植后病人促进造血功能和免疫功能的重建和恢复，也可用于干细胞的体外扩增研究。

主权项

1.一种重组人二连体干细胞因子(rhdSCF)融合蛋白基因。其特征是重组人二连体干细胞因子(rhdSCF)融合蛋白基因的核苷酸序列和氨基酸序列为：GAA GGG ATC TGC AGG AAT CGT GTG ACT AAT AAT GTA AAA GAC GTC ACT AAA TTG GTG GCA       60Glu Gly Ile Cys Arg Asn Arg Val Thr Asn Asn Val Lys Asp Val Thr Lys Leu Val Ala       20AAT CTT CCA AAA GAC TAC ATG ATA ACC CTC AAA TAT GTC CCC GGG ATG GAT GTT TTG CCA      120Asn Leu Pro Lys Asp Tyr Met Ile Thr Leu Lys Tyr Val Pro Gly Met Asp Val Leu Pro       40AGT CAT TGT TGG ATA AGC GAG ATG GTA GTA CAA TTG TCA GAC AGC TTG ACT GAT CTT CTG      180Ser His Cys Trp Ile Ser Glu Met Val Val Gln Leu Ser Asp Ser Leu Thr Asp Leu Leu       60GAC AAG TTT TCA AAT ATT TCT GAA GGC TTG AGT AAT TAT TCC ATC ATA GAC AAA CTT GTG      240Asp Lys Phe Ser Asn Ile Ser Glu Gly Leu Ser Asn Tyr Ser Ile Ile Asp Lys Leu Val       80AAT ATA GTG GAT GAC CTT GTG GAG TGC GTG AAA GAA AAC TCA TCT AAG GAT CTA AAA AAA      300Asn Ile Val Asp Asp Leu Val Glu Cys Val Lys Glu Asn Ser Ser Lys Asp Leu Lys Lys      100TCA TTC AAG AGC CCA GAA CCC AGG CTC TTT ACT CCT GAA GAA TTC TTT AGA ATT TTT AAT      360Ser Phe Lys Ser Pro Glu Pro Arg Leu Phe Thr Pro Glu Glu Phe Phe Arg Ile Phe Asn      120AGA TCC ATT GAT GCC TTC AAG GAC TTT GTA GTG GCA TCT GAA ACT AGT GAT TGT GTG GTT      420Arg Ser Ile Asp Ala Phe Lys Asp Phe Val Val Ala Ser Glu Thr Ser Asp Cys Val Val      140TCT TCA ACA TTA AGT CCT GAG AAA GAT TCC AGA GTC AGT GTC ACA AAA CCA TTT ATG TTA      480Ser Ser Thr Leu Ser Pro Glu Lys Asp Ser Arg Val Ser Val Thr Lys Pro Phe Met Leu      160TGC AGG AAT CGT GTG ACT AAT AAT GTA AAA GAC GTC ACT AAA TTG GTG GCA AAT CTT CCA      600Cys Arg Asn Arg Val Thr Asn Asn Val Lys Asp Val Thr Lys Leu Val Ala Asn Leu Pro      200AAA GAC TAC ATG ATA ACC CTC AAA TAT GTC CCC GGG ATG GAT GTT TTG CCA AGT CAT TGT      660Lys Asp Tyr Met Ile Thr Leu Lys Tyr Val Pro Gly Met Asp Val Leu Pro Ser His Cys      220TGG ATA AGC GAG ATG GTA GTA CAA TTG TCA GAC AGC TTG ACT GAT CTT CTG GAC AAG TTT      720Trp Ile Ser Glu Met Val Val Gln Leu Ser Asp Ser Leu Thr Asp Leu Leu Asp Lys Phe      240TCA AAT ATT TCT GAA GGC TTG AGT AAT TAT TCC ATC ATA GAC AAA CTT GTG AAT ATA GTG      780Ser Asn Ile Ser Glu Gly Leu Ser Asn Tyr Ser Ile Ile Asp Lys Leu Val Asn Ile Val      260GAT GAC CTT GTG GAG TGC GTG AAA GAA AAC TCA TCT AAG GAT CTA AAA AAA TCA TTC AAG      840Asp Asp Leu Val Glu Cys Val Lys Glu Asn Ser Ser Lys Asp Leu Lys Lys Ser Phe Lys      280AGC CCA GAA CCC AGG CTC TTT ACT CCT GAA GAA TTC TTT AGA ATT TTT AAT AGA TCC ATT      900Ser Pro Glu Pro Arg Leu Phe Thr Pro Glu Glu Phe Phe Arg Ile Phe Asn Arg Ser Ile      300GAT GCC TTC AAG GAC TTT GTA GTG GCA TCT GAA ACT AGT GAT TGT GTG GTT TCT TCA ACA      960Asp Ala Phe Lys Asp Phe Val Val Ala Ser Glu Thr Ser Asp Cys Val Val Ser Ser Thr      320TTA AGT TAG TAALeu Ser