一种用于动物用灭活疫苗的乳化方法

摘要

本发明涉及一种用于动物用灭活疫苗的乳化方法。本发明技术突破了乳化后按国家标准检测无分层，但放置于2～8℃保存时易分层的瓶颈，先分别以低免胚制备三种抗原，混匀三种抗原后灭活，并加入甘氨酸和硫柳汞作为水相，不同比例的白油、吐温‑80和司本‑80混匀后过滤除菌作为油相，水相油相经低温剪切乳化后，粒径D90小于等于1.0，黏度值为10～100cP，2～8℃保存24个月后，所制备的三联灭活疫苗未发现分层，效力检验合格。说明本发明可以制备出稳定、均一、安全、高效的新城疫、传染性支气管炎和禽流感H9亚型三联灭活疫苗。

主权项

一种用于动物用灭活疫苗的乳化方法，其特征在于该方法包括如下步骤：(1)新城疫病毒A‑VII株：毒种用无菌PBS做适当稀释，尿囊腔接种9～11日龄低免鸡胚，每胚10^3.0～10^6.0EID₅₀/0.1ml。选接种后48～96小时死亡的鸡胚，置2～8℃冷却12～24小时，收获鸡胚液于专业灭菌容器中，每0.1ml病毒液的病毒含量≥10^8.5EID₅₀，备用；传染性支气管炎病毒M41株：毒种用无菌PBS做适当稀释，尿囊腔接种9～11日龄低免鸡胚，每胚10^2.0～10^4.0EID₅₀/0.1ml。选接种后24～48小时死亡的鸡胚，置2～8℃冷却12～24小时，收获鸡胚液于专业灭菌容器中，每0.1ml病毒液的病毒含量≥10^6.5EID₅₀，备用；禽流感H9亚型病毒WJ57株：毒种用无菌PBS做适当稀释，尿囊腔接种9～11日龄低免鸡胚，每胚10^3.0～10^6.0EID₅₀/0.1ml。选接种后48～72小时后的鸡胚，置2～8℃冷却12～24小时，收获鸡胚液于专业灭菌容器中，每0.1ml病毒液的病毒含量≥10^8.5EID₅₀，备用；(2)将上述收获的新城疫病毒抗原、传染性支气管炎病毒抗原和禽流感H9亚型病毒抗原以一定的比例混合成水相，加入浓度为0.1％～0.25％的甲醛，于37℃，1000～2000r/min搅拌，灭活16～24小时；(3)灭活完成后，加入甘氨酸和硫柳汞，混匀成水相；(4)将白油，吐温‑80和司本‑80按一定比例混合成油相，无菌过滤；(5)乳化容器放置于冰浴中，在容器中加入油相3份，2000r/min剪切搅拌，在剪切过程中缓慢加入1份水相，当水相加完后，搅拌剪切的速度调整至5000～9000r/min，搅拌5～10min；(8)乳化完成后，测定粒径和黏度；(9)在2～8℃保存24个月后，所制备的三联灭活疫苗未发现分层、效力检验合格。