| 摘要 |
Ｃａｓ９タンパク質の欠失変異体の作製方法およびキメラＣａｓ９タンパク質の作製方法が記載される。Ｃａｓ９のＮおよびＣ末端ドメインはｃｒＲＮＡｉｔｒａｃｒＲＮＡ結合および／またはＰＡＭ選択性において重要な役割を果たし得る。活性を解析するために、ＮＭ（ナイセリア・メニンジティディスのＣａｓ９）のＮ末端および／またはＣ末端をＳＴ１の相同な領域と置換して、ＮＭとＳＴＩ（ストレプトコッカス・サーモフィラスのＣａｓ９）との間の一連のドメイン交換変異体を作製した。次に、レポーター内のガイドＲＮＡおよび／またはＣａｓ９特異的ＰＡＭを変更して、本明細書に記載の転写レポーターアッセイを用いてキメラタンパク質を試験して、タンパク質特異性へのドメイン交換の影響を決定した。ＮＭとＳＴＩとの間のＮ末端ドメイン交換はいずれもＮＭに新規な特性を付与しなかった。Ｃ末端交換により、ＳＴＩのｃｒＲＮＡｉｔｒａｃｒＲＮＡ複合体と相互作用可能であり、さらにＳＴＩ特異的ＰＡＭを有するレポーターを抑制可能である、ＮＭ‐ＳＴＩハイブリッドが作製された。 |
