一种建立可持续传代的树鼩精原干细胞细胞系的方法

摘要

本发明公开一种建立可持续传代的树鼩精原干细胞细胞系的方法，专用培养基成分主要包括bFGF、LIF、EGF、GDNF、wnt3a和FBS，分离和培养方法是将消化成单细胞的树鼩睾丸组织标记抗体后，利用流式细胞术或磁珠筛选获得Thy1+细胞群，将分选获得的树鼩睾丸Thy1+细胞转入培养皿中培养，至培养皿中出现三五成群的精原干细胞集落时，转入新的有丝裂霉素处理过的专用饲养层包被的培养皿中传代培养。本发明的细胞分选效率高，专用培养基成分确定，并避免了异源细胞的污染。培养方法简单高效，对树鼩精原干细胞的分离具有获得目标细胞率高，建立可持续传代细胞系成功率高、细增殖传代能力强和安全稳定的优点。

主权项

一种建立可持续传代的树鼩精原干细胞细胞系的方法，包括以下步骤：(1)树鼩精原干细胞的分离取3月‑1.5岁年龄树鼩睾丸，对树鼩睾丸消化，加入抗体human CD90/Thy1，利用流式细胞术或免疫磁珠分选法分离获得Thy1+细胞；(2)树鼩精原干细胞的原代培养将步骤(1)获得的Thy1+细胞接种在用明胶包被的培养皿中，使用培养树鼩精原干细胞的专用培养基进行培养，培养至培养皿中出现3‑5成群的精原干细胞集落；(3)树鼩精原干细胞的传代培养将步骤(2)培养的树鼩精原干细胞转入经处理后的饲养层细胞的培养皿中进行传代培养。