两种茶园叶蝉卵寄生蜂的分子鉴定方法

摘要

本发明提供了两种茶园小绿叶蝉优势寄生蜂的分子鉴定方法，该方法与传统形态学鉴定方法相比，1、不需要专业的设备(如三维景深显微拍照系统)，2、不要求具有严格的形态分类学背景，3、具有快速准确且易操作的特点，而且该方法可用于一些其它种类卵寄生蜂的分子鉴定。其特征在于以下步骤，(1)采集叶蝉产卵枝条，(2)收集叶蝉卵寄生蜂，(3)形态照片采集，(4)寄生蜂DNA提取，(5)基因克隆与分析，(6)分子系统学鉴定。

主权项

两种茶园叶蝉卵寄生蜂的分子鉴定方法，其特征在于，包括以下操作步骤：（1）采集叶蝉产卵枝条，茶园内随机剪取嫩茎有明显刺痕的一芽五叶茶梢，实验室内放入水中培养；（2）收集叶蝉卵寄生蜂，取水中培养的一芽五叶茶梢，实验室内环剥茶梢，挑出小绿叶蝉的卵放在蒸馏水浸湿的滤纸上保湿观察，待寄生蜂羽化后以指形玻璃管收集叶蝉卵寄生蜂；（3）形态照片采集，将羽化的寄生蜂用三维景深系统拍照，进行初步形态鉴定，之后‑20℃无水乙醇保存；（4）寄生蜂DNA提取，将初步形态鉴定后的单头寄生蜂虫体经碱裂解法提取DNA，‑20℃保存；（5）基因克隆与分析，以引物扩增寄生蜂样本DNA，基因片段克隆至T载体测序，将序列剪接后进行同源性blast分析；（6）分子系统学鉴定，以每种寄生蜂特异序列作为标记基因，构建系统进化树，根据聚类结果判定两种叶蝉卵寄生蜂；步骤（5）中，所述引物根据膜翅目昆虫系统进化所用线粒体标记基因，设计合成，通过PCR扩增进行筛选。