一种辅酶Q₁₀的提取制备方法

摘要

本发明属于辅酶制备技术领域，具体涉及一种辅酶Q₁₀的提取制备方法，先将光合细菌在自然生态条件下培养至生物量达10⁸时采收；对采收的细菌菌液进行离心处理得到浓缩菌泥，再将浓缩菌泥进行破壁处理得到破壁菌体；对破壁菌体皂化后用石油醚进行萃取得辅酶Q₁₀粗制品；将辅酶Q₁₀粗制品制成辅酶Q₁₀乙醇溶液后经HZ816树脂吸附、丙酮解析洗脱得到辅酶Q₁₀浓缩液；将浓缩液静置后析出的结晶体经干燥制得辅酶Q₁₀纯品；该方法步骤简单，操作简便，原理可靠，设计科学，成本低廉，溶剂平均回收率高，条件可控，提取效率高，产品纯度好。

主权项

一种辅酶Q₁₀的提取制备方法，其特征在于具体包括以下工艺步骤：(1)细菌发酵：将培养用水加入透光容器后，加入培养用水重量0.1％的消毒剂，搅拌均匀、静置后过滤得灭菌清液；向灭菌清液中加入培养用水重量1％的细菌培养剂，充分溶解、搅匀后得培养液，向培养液中加入沼泽红假单胞菌种液并搅拌均匀；把已接种好的沼泽红假单胞菌分装至发酵容器中，留气室、置于室外有光照处，每日搅拌十次以上，15‑40℃条件下培养2‑5天至生物量达10⁸时采收；(2)离心浓缩：将采收的沼泽红假单胞菌菌液用碟式离心机以1000L/h的速率连续离心使离心率达95％以上，得到浓缩菌泥；(3)破壁处理：将浓缩菌泥放入细胞破碎机进行破壁处理，控温10℃以下，压力10000psi，反复两次，使菌体破壁率达90％以上，以得到破壁菌体；(4)皂化处理：向每150kg的破壁菌体中加入焦性没食子酸700g，氢氧化钾5kg，甲醇35kg和纯净水50L，混合均匀后放入反应釜中回流30min，然后迅速冷却至室温；(5)萃取回收：向反应釜中加入石油醚萃取2次，每次加入的石油醚的体积数与步骤(4)中破壁菌体的质量数的比值为1:1，然后快速搅拌5分钟，在温度为20℃条件下静置1h后分离萃取液即石油醚层，将两次萃取液合并回收；将反应釜升温至65℃，经挥发回收残留石油醚，反应釜中所剩物即为辅酶Q₁₀粗制品；(6)纯化处理：具体步骤包括：Ⅰ.将辅酶Q₁₀粗制品用无水乙醇溶解后制成体积百分比浓度为20％的辅酶Q₁₀乙醇溶液；Ⅱ.将辅酶Q₁₀乙醇溶液加入反应釜中，每100L辅酶Q₁₀乙醇溶液中加入HZ816树脂30kg，持续搅拌30min，使辅酶Q₁₀充分被HZ816树脂吸附，然后分离取出HZ816树脂；Ⅲ.将吸附有辅酶Q₁₀的HZ816树脂用丙酮解析洗脱2次；Ⅳ.将两次丙酮洗脱液进行合并，减压到常压101325Pa，回收丙酮后得到辅酶Q₁₀浓缩液；Ⅴ.将浓缩液在0℃条件静置过夜24小时有结晶体析出，回收结晶体经干燥后得纯品，纯度达93.4％；步骤(1)中还可选用球形红假单胞菌、脱氢假单胞菌、脱氮付球菌或荚膜红细菌替代沼泽红假单胞菌。