一种胰岛素类似物的化学合成方法

摘要

本发明公开一种胰岛素类似物的化学合成方法，包括片段合成、片段缩合、还原复性和纯化四个步骤，将胰岛素类似物的A链和B链分片段合成，第一个二硫键氧化时，将A链中Cys-Asn和B链先氧化在一起，由于Cys-Asn二肽价格低廉，分子间氧化时，二肽可大大过量，以提高分子间氧化效率，而在过量的氧化二肽，由于没有其他活性基团，可用强还原途径回收二肽，从而解决分子间二硫键氧化得率低的问题，通过片段缩合方法得到的AB链已经在一起的胰岛素前体，其结构与C链在的情况下的胰岛素类似，通过一定条件下的谷胱甘肽氧化-还原体系进行复性，得到得率很高的胰岛素。

主权项

一种胰岛素类似物的化学合成方法，所述胰岛素类似物包括A链和B链，其中A链序列为GIVEQCCTSICSLYQLENYCN,B链序列为FVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTPK(R)T，R为脂肪酸及其类似物包括但不限于（C8，C10，C12，C14，C16，C18），R1‑Glu(OH)‑OH，其特征在于：合成步骤包括片段合成、片段缩合、还原复性和纯化四个步骤：（1）片段合成：将A链序列分成CN片段、GIVEQCCTSICSLYQLENY片段分别合成，B链序列分成SHLVEALYLVCGERGFFYTPK(R)T片段、FVNQHLCG片段分别合成,所述CN片段采用液相合成二肽Cys‑Asn，所述GIVEQCCTSICSLYQLENY片段采用Fmoc固相合成法合成全保护多肽Boc‑GIVEQCCTSICSLYQLENY‑COOH，所述SHLVEALYLVCGERGFFYTPK(R)T片段采用固相合成法合成N端Fmoc保护侧链游离的Fmoc‑SHLVEALYLVCGERGFFYTPK(R)T，所述FVNQHLCG片段采用Fomc固相合成法合成全保护多肽片段Boc‑FVNQHLCG‑COOH；（2）片段缩合：步骤（1）中Fmoc‑SHLVEALYLVCGERGFFYTPK(R)T游离的‑SH和二肽Cys‑Asn中游离的巯基通过二硫键氧化缩合成中间体1，所述中间体1和Boc‑GIVEQCCTSICSLYQLENY‑COOH通过酰胺键缩合成中间体2，所述中间体2通过脱保护剂脱去Fmoc之后再与Boc‑FVNQHLCG‑COOH缩合成中间体3，所述中间体3通过TFA脱去所有的保护基团得到胰岛素类似物前体；（3）还原复性：将步骤（2）中胰岛素类似物前体溶于谷胱甘肽的复性液中，复性1‑5天，得到胰岛素类似物粗品；（4）纯化：将步骤（3）得到的胰岛素粗品再经过HPLC纯化，得到高纯度胰岛素类似物。