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一种核酸靶序列捕获测序文库的制备方法，其特征在于：其步骤如下：a)根据目标靶序列设计并合成两组捕获探针A和B溶液；捕获探针A溶液中捕获探针A(1,2,3…n)的结构从5’到3’端分别是：生物素标记、公共序列P1和与靶序列一侧互补的特异性捕获引物序列a(1,2,3…n)；捕获探针B溶液中捕获探针B(1,2,3…n)的结构从5’到3’端分别是：公共序列P2和与靶序列一侧相同的特异性引物序列b(1,2,3…n)；b)在待测的DNA或RNA样品中首先加入捕获探针A溶液，然后同时加入DNA延伸所需的DNA聚合酶或逆转录酶、dNTP和含Mg2+的缓冲液，捕获探针A通过其3’端的靶特异性序列a(1,2,3…n)和待测样品中的互补DNA或RNA链杂交，并且探针的3’末端在DNA聚合酶或逆转录酶的作用下以靶序列为模板进行DNA合成，将靶序列复制到捕获探针A上，形成有靶序列的捕获探针A单链，捕获探针A单链的结构为：从5’到3’端分别是生物素标记，公共引物序列P1，特异性引物序列，目标靶序列；c)再加入链霉亲合素包被的磁珠，捕获探针A通过其5’末端的生物素标记结合到链霉亲合素包被的磁珠上，然后分离磁珠，将反应液去除，洗涤磁珠，去除非特异性吸附；将结合有捕获探针A延伸产物的磁珠重新悬浮在缓冲液中；d)在含有磁珠的缓冲液中再添加捕获探针B溶液，捕获探针B通过其3’末端的靶特异性序列与捕获探针A上复制的目标靶序列单链互补区域杂交，然后洗涤磁珠去除非特异性吸附，将磁珠重新悬浮在缓冲液中；E)在缓冲液中加入DNA聚合酶、dNTP和含Mg2+的缓冲液，杂交的捕获探针B的3’末端以捕获探针A延伸产物为模板进行DNA合成，捕获探针B延伸产物的结构为：公共引物序列P2‑B组特异性引物序列‑目标靶序列‑A组特异性引物序列‑公共引物序列P1；F)洗涤磁珠，通过加热变性使捕获探针B延伸产物从磁珠上解离洗脱下来；收集捕获探针B延伸产物；G)以捕获探针B延伸产物为模板，用公共引物a和b进行文库PCR扩增；扩增产物即为靶序列捕获测序文库。 |
