主权项 |
一种测定植物组织氨基酸泄漏率的方法,其步骤是:a.试验准备根据试验处理数,准备足量5‑10ml带螺盖离心管,用无离子水洗净后烘干备用;b.准备样品处理前用蒸馏水冲洗待测植物组织,用滤纸吸干表面水分; 处理结束,准确称取各处理植物新鲜组织0.0401‑0.0509 g,置a步骤准备的离心管中; c.浸提在b步骤含植物新鲜组织的离心管中各加入4mL蒸馏水,在室温条件下,浸提2‑3 h,摇床轻摇浸提3 h;d.离心浸提结束,立即将c步骤的浸提管放置在转速为3000rev/min的离心机离心5‑10分钟;e.去除杂蛋白干扰上述d步骤离心结束,吸取浸提管中的上清液3.0 ml,转入另一测试管,加入0.3ml的72%(w/v)三氯乙酸溶液,再在3000rev/min离心5‑10分钟,以沉淀去除杂蛋白干扰;f.测定鲜组织的吸光度将e步骤离心后的测试管上清液倒入比色杯,在紫外分光光度计读取波长280nm的吸光度值A280nm,空白为蒸馏水,获得鲜组织在波长280nm的吸光度值A280nm,测定后将比色杯液体倒回测试管中;g.高压灭杀将e步骤吸取上清液后留有植物组织和1ml浸提液的浸提管上盖置高压灭菌锅灭杀20min,浸提管称灭杀管;h.合并离心将e步骤测试管测试液全部回倒入其g步骤对应灭杀管中,合并后再在3000rev/min离心5‑10分钟,以沉淀去除杂蛋白干扰;i.测定杀死组织的吸光度将上述h步骤合并离心的灭杀管上清液倒入比色杯,空白为蒸馏水,再次测定吸光度值A<sub>k</sub>280nm,即为杀死样品在波长280nm的吸光度值A<sub>k</sub>280nm;j.计算氨基酸泄漏率氨基酸泄漏率为各处理鲜组织在波长280nm的吸光度值A280nm占杀死样品在波长280nm的吸光度值A<sub>k</sub>280nm的比率,按下列公式计算:氨基酸泄漏率(%)=A280nm×100/A<sub>k</sub>280nm。 |