| 主权项 |
一种血叶兰组织培养快速繁殖方法，其特征在于：包括以下依序进行的步骤：(1)外植体的准备阶段采集野生血叶兰植株，种植于具有遮阳网的网室内干净的河沙中15天以上，从中选取叶片硬挺、无病虫害的植株作为组织培养的材料，用清水冲洗干净，置于室内放置2‑4天，剪取带顶芽的茎段和/或带茎节的茎段，除去叶片，作为外植体备用；(2)消毒阶段将步骤(1)中所准备的外植体在800‑1000mg/L的二氧化氯溶液中进行表面消毒，浸泡消毒期间不断搅拌，所述浸泡消毒时间为20‑25min；消毒后，用无菌滤纸或吸水纸将外植体表面的水吸干，备用；(3)诱导培养阶段，包括以下依序进行的步骤：①建立外植体无菌培养体系将步骤(2)中消毒好的外植体取出置于无菌的器皿中进行修剪，修剪后插入诱导培养基A中；培养环境温度为23±2℃，环境湿度为40‑50％，进行无光照黑暗培养，培养周期为10‑15天；所述诱导培养基A为：MS基本培养基+0.3‑0.5mg/L NAA+6.5‑7.2g/L琼脂+2.0‑2.5g/L活性炭，pH值为5.2‑5.6；②诱导茎节萌发腋芽和顶芽伸长将步骤①中诱导培养基A诱导培养后的，无污染和无褐变的外植体转移到诱导培养基B中进行光照培养，培养环境温度为23±2℃，环境湿度为40‑50％，光照强度为1000‑2000lux，光照周期为8‑10h/d，培养周期为20‑30天；所述诱导培养基B为：MS基本培养基+0.2‑0.3mg/L 6‑BA+0.5‑0.8mg/L NAA+8.0‑8.5g/L琼脂+15‑25g/L白糖，pH值为5.2‑5.6；(4)增殖培养阶段将诱导培养后带有萌发的腋芽、顶芽的外植体切成带一个茎节的茎段，转接到增殖培养基中进行光照培养，培养环境温度为23±2℃，环境湿度为40‑50％，光照强度为2000‑3000lux，光照周期为8‑10h/d，培养周期为80‑90天；所述增殖培养基为：MS基本培养基+0.5‑1.0mg/L 6‑BA+0.3‑0.5mg/L NAA+1.0‑2.5g/L蛋白胨+6.0‑7.0g/L琼脂+15‑25g/L白糖，pH值调整为5.2‑5.6；(5)生根培养阶段将步骤(4)增殖培养获得的带2.0cm以上芽的小苗，转接至生根培养基中进行生根培养；培养环境温度为23±2℃，环境湿度为45‑55％，光照强度为3000‑4500Lux，光照周期为10‑12h/d，培养周期为30‑40天；所述生根培养基为：MS培养基+0.5‑1.0mg/L NAA+0.07‑0.09mg/L芸苔素+40‑60g/L香蕉泥+1.5‑2.5mg/L活性炭+18‑22g/L白糖+7.5‑8.0g/L琼脂，pH值为5.2‑5.6；(6)移栽种植阶段将步骤(5)中生根培养后获得的种苗，连同培养瓶转移至温室大棚内炼苗10‑20天，炼苗的大棚环境条件要求温度为20‑30℃，光照强度为4000‑5000lux，湿度为45‑60％；炼苗后将种苗取出洗净根部培养基，种植在栽培基质中，所述栽培基质为草炭土、沼渣和分化黄壤土以2.0‑2.5︰1‑1.5︰1的体积比例混合的混合物，之后置于生态林下或可控温湿度的设施大棚内，栽培环境温度15‑32℃，湿度要求60‑90％，光照强度为4000‑7000lux；试管苗移出培养瓶种植在栽培基质中第4‑5天开始，每10‑14天浇施一次质量百分比浓度为0.004‑0.006％磷酸二氢钾溶液，共浇施2次；试管苗移出培养瓶种植在栽培基质中第20‑30天开始，浇施质量百分比浓度为0.004‑0.006％的氯化铵溶液或质量百分比浓度为0.004‑0.006％的硝酸铵溶液，每14‑18天浇施一次所述氯化铵溶液或硝酸铵溶液，所述氯化铵溶液和硝酸铵溶液为交替使用，总共浇施2‑8次，于采收前50‑60天停止施肥；试管苗移出培养瓶种植在栽培基质中第120‑200天后采收。 |
