CRISPR-Cas9特异性敲除猪GFRA1基因的方法及用于特异性靶向GFRA1基因的sgRNA

摘要

本发明公开了一种运用CRISPR-Cas9特异性敲除猪GFRA1基因的方法及用于特异性靶向GFRA1基因的sgRNA。本发明的特异性靶向GFRA1基因的sgRNA在GFRA1基因上的靶序列符合5’-N(20)NGG-3’的序列排列规则，其中N(20)表示20个连续的碱基，其中每个N表示A或T或C或G；在GFRA1基因上的靶序列位于GFRA1基因的N端的5个外显子编码区或与相邻内含子的交界处；在GFRA1基因上的靶序列是唯一的。本发明的sgRNA用于CRISPR-Cas9特异性敲除猪GFRA1基因的方法中，能够快速、精确、高效、特异性地敲除猪GFRA1基因，有效地解决构建GFRA1基因敲除猪周期长和成本高的问题。

主权项

在运用CRISPR‑Cas9特异性敲除猪GFRA1基因中用于特异性靶向GFRA1基因的sgRNA，其特征在于：（1）所述sgRNA在GFRA1基因上的靶序列符合5’‑N(20)NGG‑3’的序列排列规则，其中N(20)表示20个连续的碱基，其中每个N表示A或T或C或G，符合所述规则的靶序列位于正义链或反义链；（2）所述sgRNA在GFRA1基因上的靶序列位于GFRA1基因的N端的5个外显子编码区，或靶序列的一部分位于GFRA1基因的N端的5个外显子，其余部分跨越与相邻内含子的交界，位于相邻内含子；（3）所述sgRNA在GFRA1基因上的靶序列是唯一的。