一种基于下一代测序技术检测EGFR/KRAS/BRAF基因突变位点的多重PCR引物和方法及应用

摘要

本发明提供了一种基于下一代测序技术检测EGFR/KRAS/BRAF基因突变位点的多重PCR引物，包括SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:28所示14对引物对中的至少两对；优选包括至少包括扩增EGFR、KRAS和BRAF基因中任意两个或三个基因的引物对，其中，每个基因扩增一个或多个外显子的区域，每个外显子区域采用一对或多对引物对。本发明提供的多重PCR引物组能用于EGFR/KRAS/BRAF基因突变位点多样性的高效检测，可覆盖EGFR 18～21号外显子、KRAS 2号外显子和BRAF 15号外显子。

主权项

一种基于下一代测序技术检测EGFR/KRAS/BRAF基因突变位点的多重PCR引物，其特征在于，包括如下a)‑f)引物对中的至少两对：a)用于扩增EGFR基因的外显子18的区域的引物对：SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示引物对和/或SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示引物对；b)用于扩增EGFR基因的外显子19的区域的引物对：SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示引物对和/或SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示引物对；c)用于扩增EGFR基因的外显子20的区域的引物对：SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10所示引物对、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12所示引物对和SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14所示引物对中的一种或多种；d)用于扩增EGFR基因的外显子21的区域的引物对：SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16所示引物对、SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18所示引物对和SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20所示引物对中的一种或多种；e)用于扩增KRAS基因的外显子2的区域的引物对：SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:22所示引物对和/或SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24所示引物对；f)用于扩增BRAF基因的外显子15的区域的引物对：SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26所示引物对和/或SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28所示引物对。