发明名称 |
一种环状芽孢杆菌的高通量筛选方法 |
摘要 |
本发明属于发酵工程和微生物育种的技术领域,公开了一种产β-半乳糖苷酶的环状芽孢杆菌的高通量筛选方法。主要步骤是:将初始菌株活化后,经过紫外线诱变和氯化理诱变,用96孔板进行高通量筛选,得到酶能力提高的环状芽孢杆菌突变株。本发明利用传统物理与化学相结合的诱变方式,提高菌株的突变机率,采用高通量筛选工具,减少筛选工作量,提高筛选效率,加快菌种选育的进程,筛选出最佳菌株。 |
申请公布号 |
CN105274086A |
申请公布日期 |
2016.01.27 |
申请号 |
CN201510681503.4 |
申请日期 |
2015.10.19 |
申请人 |
量子高科(中国)生物股份有限公司 |
发明人 |
曾宪经;邓宝浣;陈振鹏;阮鸿波;陈子健 |
分类号 |
C12N15/01(2006.01)I;C12N13/00(2006.01)I;C12R1/09(2006.01)N |
主分类号 |
C12N15/01(2006.01)I |
代理机构 |
广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 |
代理人 |
张海文 |
主权项 |
一种环状芽孢杆菌的高通量筛选方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)出发菌活化:将环状芽孢杆菌进行划线培养,挑取单菌落于新鲜的LB培养基中培养,然后离心收集菌体,重新悬浮于无菌水中;(2)紫外诱变:将步骤(1)细胞悬浮液用紫外灯照射;(3)氯化理诱变:照射处理后的菌液,立即放入新鲜的LB培养基中,避光培养,并稀释菌液浓度,红光下涂布于含LiCl的LB平板进行培养;(4)菌株的筛选:向步骤(3)中诱变获得的突变株中滴入X‑gal溶液,观察菌落的显色情况,筛选菌落变深蓝的突变株,接种于含有培养基的96孔板;(5)将上述96孔板置于摇床中培养,通过检测β‑半乳糖苷酶活力进行筛选,得到F1代;(6)将F1中β‑半乳糖苷酶活力最高的菌株重复步骤(2)~(5),得到高产β‑半乳糖苷酶的环状芽孢杆菌菌株。 |
地址 |
529081 广东省江门市高新区高新西路133号 |