一种克拉维酸高产菌株的高通量可视化筛选方法

摘要

本发明公开了一种克拉维酸高产菌株的高通量可视化筛选方法。首先将两种不同荧光蛋白分别与克拉维酸合成基因簇的早期基因和晚期基因融合，获得出发重组菌株；然后诱变该重组菌株，利用突变菌产生荧光强度的变化来判断克拉维酸合成基因簇是否发生突变。初筛采用肉眼观察菌落荧光强度，选择荧光强度较大的菌落；复筛选取初筛获得的菌落，经培养后提取全细胞蛋白，用酶标仪测定荧光强度，获得克拉维酸合成基因簇高水平表达的突变菌株，最后通过发酵验证突变株的克拉维酸发酵水平。本发明的筛选方法降低了筛选的随机性和盲目性，大幅度降低劳动量，提高了筛选通量和有效性。

主权项

一种克拉维酸高产菌株的高通量可视化筛选方法，其特征在于，步骤如下：(1)将两种不同荧光蛋白分别与克拉维酸合成基因簇的早期基因和晚期基因融合，构建基于工业菌株的重组菌株作为诱变筛选的出发菌株；(2)将出发菌株在固体培养基上进行扩大培养，收集孢子，并用物理或化学的方法对孢子进行诱变；(3)将诱变后的孢子经稀释后涂布在固体培养基上，进行分离培养，暗室中直接观察单菌落的荧光强度，选择荧光强度大于出发菌株的单菌落进行复筛；(4)将进行复筛的突变株接种于装有液体培养基的深孔板中，摇床培养，离心，弃去上清液保留菌丝，加入裂解液处理，得到全细胞蛋白裂解液，测定全细胞蛋白裂解液的荧光强度，选择两种不同荧光蛋白荧光强度较出发菌株均有提高的菌株进行摇瓶发酵筛选，获得克拉维酸高产菌株。