一种毕赤酵母菌体重复发酵表达外源蛋白的方法

摘要

本发明提供了一种毕赤酵母菌体重复发酵表达外源蛋白的方法，该方法直接利用常规发酵后的毕赤酵母，通过参数和步骤的调整，使得该毕赤酵母可重复利用三次以上，同时外源蛋白的产量也可达到工业化生产的标准，该方法可显著降低后续发酵的成本，缩短发酵的时长，具有广泛的推广价值。

主权项

一种毕赤酵母菌体重复发酵表达外源蛋白的方法，包括下述步骤：A、常规发酵即进行常规的毕赤酵母高密度发酵；B、第一次重复发酵：B1、离心常规发酵后的发酵液，收集菌泥；B2、配制重复发酵培养基，加入罐中，灭菌后将收集的菌泥也加入罐中；所述的重复发酵培养基的配方除了不含有甘油外，其他组分及组分含量与常规发酵培养基相同；B3、流加含有1.2%体积比微量盐溶液的50%甘油，增加菌体活力；所述的微量盐溶液的配方包括：6.0g五水硫酸铜，0.08 g碘化钠，3.0g一水合硫酸锰，0.2g二水钼酸钠，0.02g硼酸，0.5g氯化钴，20.0g氯化锌，65.0g硫酸亚铁，0.2g生物素，5.0 ml浓硫酸，加水至总体积为1L；    B4、甘油消耗完后，饥饿30min，开始流加甲醇，甲醇流加速度为0.05ml /min/L~0.2ml/min/L，所述的甲醇的流加速度是相较于每升培养基而言；B5、甲醇消耗完毕后下罐。