一种家蚕二化性品种卵转基因用蚕卵的制备方法

摘要

本发明涉及昆虫生物工程领域，更具体的说，涉及一种家蚕二化性品种的卵转基因方法，利用亲代蚕卵催青孵化时期的保护温度与光制组合，以及对子代受精前蚕卵的人工孵化处理，获得早期活化卵，然后进行常规显微注射并进行筛选，获得转基因蚕卵的方法。使用本发明方法，能够解决二化性蚕品种滞育性卵转基因注射后人工孵化处理对蚕卵的伤害所导致的不能孵化的问题；能够解决二化性蚕品种滞育性卵早期盐酸孵化处理后转基因注射孵化率很低的问题；也解决了二化性蚕品种滞育性卵受精后盐酸孵化处理、以及利用亲代蚕卵低温与黑暗孵化条件获得的二化性品种子代非滞育卵的胚胎强健性差和幼虫成活率低的问题。

主权项

一种家蚕二化性品种卵转基因用蚕卵的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：(1)家蚕二化性品种的亲代卵，整个催青孵化过程使用20℃、相对湿度75％-85％、光照强度低于0.1勒克斯的黑暗条件保护；孵化后幼虫使用20℃-22℃、相对湿度80％-90％、自然光制条件中桑叶或人工饲料饲养至3龄起蚕；3龄起蚕开始，使用25℃-26℃、75％-80％相对湿度、自然光制条件中桑叶或人工饲料饲养至结茧；然后在24℃-26℃、70％-80％相对湿度、LD＝18h∶6h的长光制条件中保护至羽化，获得产弱滞育性蚕卵的母蛾；(2)收集步骤(1)中羽化后的母蛾，23℃-26℃、光照强度低于10勒克斯弱光线条件与雄蛾交配3h-6h后，分开交配雌雄蛾，雌蛾投放在生产用产卵纸，25℃-26℃、光照强度低于0.1勒克斯的黑暗环境产卵；收集10min-15min内所产的弱滞育性卵作为人工孵化处理群体，在产卵后25℃-26℃环境温度中0.5h-1.5h完成盐酸人工孵化处理；(3)收集步骤(2)中人工孵化处理群体蚕卵，经盐酸活化处理，同时将蚕卵从产卵纸脱落，获得活性化蚕卵。