一种双信号放大电化学发光生物传感器的制备方法及应用

摘要

本发明公开一种双信号放大电化学发光生物传感器的制备方法，步骤如下：将金纳米粒子与黄嘌呤氧化酶溶液混合反应，然后加入TCEP处理过的DNA，继续反应可得纳米信标；将处理好的金电极浸泡至含有肯普肽的磷酸缓冲溶液中反应，再用巯基已烷封闭空白位点，然后放置于含有蛋白激酶和腺嘌呤核苷三磷酸的TBS缓冲液中反应，随后分别用锆离子和纳米信标进行处理，通过锆离子与磷酸根的配位作用将纳米信标组装于磷酸化的肯普肽修饰电极上，得到双信号放大电化学发光生物电极；将该电极作为工作电极，和参比电极、辅助电极正确连接在电化学工作站上以组成双信号放大电化学发光生物传感器。该传感器可应用于蛋白激酶的活性检测。

主权项

一种双信号放大电化学发光生物传感器的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)纳米信标的制备将金纳米粒子与黄嘌呤氧化酶溶液混合反应，然后加入TCEP处理过的DNA，继续反应可得纳米信标；(2)磷酸化的肯普肽修饰电极的制备先将金电极进行预处理，然后将处理好的金电极浸泡至含有肯普肽的磷酸缓冲溶液中反应，反应完成后冲洗干燥；再用巯基已烷封闭空白位点，然后放置于含有蛋白激酶和腺嘌呤核苷三磷酸的TBS缓冲液中，反应得到磷酸化的肯普肽修饰电极；(3)双信号放大电化学发光生物电极的制备将步骤(2)得到的磷酸化的肯普肽修饰电极清洗干净，随后将该电极置于50μL 0.5mmol/L锆离子溶液中处理1h，得到锆离子修饰的电极，再置于30μL步骤(1)制备的纳米信标中，控制作用时间为10‑100min，通过锆离子与磷酸根的配位作用将纳米信标组装于磷酸化的肯普肽修饰电极上，得到双信号放大电化学发光生物电极；(4)双信号放大电化学发光生物传感器的制备将步骤(3)得到的双信号放大电化学发光生物电极作为工作电极，和参比电极、辅助电极正确连接在电化学工作站上以组成双信号放大电化学发光生物传感器。