一种快捷测定水中MC-RR的量子点荧光检测方法

摘要

本发明涉及一种快捷测定水中微囊藻毒素-RR（MC-RR）的量子点荧光检测方法，属于分析化学检测领域。该方法利用EDC和NHS活化水溶性核壳式CdSe/CdS量子点（QDs）使之与MC-RR单克隆抗体进行共价连接，形成QDs-MC-RR生物共轭体。在优化后的反应条件下，将不同浓度的MC-RR加入到生物共轭体中，发生荧光猝灭现象，荧光猝灭程度与MC-RR的浓度呈一定相关。该方法快捷、廉价、简便且高灵敏度，可直接应用于水中MC-RR的测定。

主权项

一种快捷测定水中MC‑RR的量子点荧光检测方法，其特征在于步骤如下：（1）制备水溶性核壳式结构的CdSe/CdS量子点取合成的有机相CdSe/CdS 1mL，用20μL巯基乙酸转相，正己烷洗涤，干燥，得到CdSe/CdS量子点QDs粉末；称取20 mg CdSe/CdS量子点粉末溶于pH= 7.17的10 mL 0.02mol/L的PBS缓冲溶液中，即得到2.0mg/mL水溶性的CdSe/CdS量子点QDs；（2）制备QDs‑MC‑RR生物共轭体及反应条件的优化将2mg EDC、0.5mg NHS和40µL 2.0mg/mL的QDs混合于2mL 0.02mol/L pH为7.17的PBS缓冲溶液中，混匀后于室温下孵育30min，加入2µL巯基乙酸终止活化反应，5min后向活化好的QDs溶液中加入10µL 10nmol/L MC‑RR单克隆抗体，37℃恒温震荡培养1h，加入10µL 0.04mol/L三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液终止反应；再用100KD的超滤膜离心管10000rpm离心纯化得到QDs‑MC‑RR 生物共轭体，加入5µL 5%牛血清蛋白溶液封闭；检测MC‑RR反应条件：PBS缓冲溶液pH为7.17，反应时间60min，反应温度37℃，QDs浓度2.0mg/mL；（3）检测MC‑RR标准曲线的建立向上述2mL QDs‑MC‑RR生物共轭体溶液中加入10µL 不同浓度的MC‑RR，分别为  0.0nmol/L、0.5nmol/L、1.0nmol/L、2.0nmol/L、3.0nmol/L、4.0nmol/L的标准系列，在400nm激发波长下QDs‑MC‑RR生物共轭体的荧光猝灭程度与MC‑RR浓度的关系：该生物共轭体系的荧光强度与MC‑RR浓度在一定范围内呈线性相关关系，且符合Lambert–Beer公式：                                  （F₀‑F_n）/F₀=0.1103C+0.02293，r=0.99460；F₀为未加入MC‑RR时QDs‑MC‑RR生物共轭体的荧光强度；F_n为加入MC‑RR后QDs‑MC‑RR生物共轭体的荧光强度；C为加入MC‑RR样品的浓度，单位：nmol/L；（4）方法精密度及检出限MC‑RR浓度分别为0.5nmol/L、2.0nmol/L、4.0nmol/L时平行测定7次，精密度RSD分别为11.3%、5.6%、4.2%；MC‑RR浓度为0.25nmol/L时平行测定11次，方法的检出限为2.4×10^‑10 mol/L。