一种诗琳通含笑离体培养再生植株方法

摘要

本发明公开了一种诗琳通含笑的离体培养再生植株方法，包括（1）采取外植体及其材料处理、（2）建立无菌繁殖体、（3）增殖培养、（4）生根培养、（5）移植、（6）幼苗培育六个步骤。本发明的诗琳通含笑离体培养再生植株方法诱导率和成活率高，步骤简便可行，对保存和抢救世界珍稀濒危木兰科品种和繁殖极度濒危树种有着非常迫切和重要意义，为研究木兰科植物大树嫩枝进行组织培养，克服污染率高、褐化严重、诱导率低、移植成活率低等组培繁殖技术具有极其宝贵的学术研究价值。

主权项

一种诗琳通含笑离体培养再生植株方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)采取外植体及其材料处理：采取生长健壮，无病虫害的诗琳通含笑7年生大树主杆上萌发出的嫩枝条，经保鲜处理后，低温带回实验室；所述材料处理是剪去嫩枝条上的叶片，用新洁尔灭清洗后用流水冲洗，切成2cm带1‑2个腋芽的茎段；(2)建立无菌繁殖体：将修剪好的茎段在实验室里用0.1％的氯化汞消毒灭菌3‑10分钟，再用无菌水洗3‑4次，一瓶一段接种于初代培养基MS1上，在室温为20‑30℃，每日光照8‑12小时，光照强度800‑2000LX的条件下培养15‑30天，从叶腋萌发出绿芽，剪取绿芽接种于增殖培养基MS2上，诱导出腋芽和不定芽并能够连续生长繁殖，完成无菌繁殖体的建立；(3)增殖培养：将无菌繁殖体接种于增殖培养基MS2中，放置在人为控制室温为20‑30℃，每日光照8‑12小时，光照强度800‑2000LX的条件下培养15‑30天，从叶腋萌发出无菌绿芽，剪取绿芽接种于增殖培养基MS2上，芽丛增殖，培养15‑30天后，芽丛增殖倍数2‑4倍，在无菌条件下再将其分割转接，经过反复继代培养扩大繁殖；(4)生根培养：将增殖培养后获得的丛生芽接种于生根培养基中培养，即，当丛生芽高在15mm以上时，将芽从基部切下，分割成单株接种于生根培养基MS3中，放置在室温20‑30℃，每日光照8‑12小时，光照强度在1000‑10000LX的条件下15‑20天，苗开始出根，再放置到75％遮荫条件下温室中促根并炼苗20‑30天，生根瓶苗叶片展开，茎芽生长健壮，形成完整植株；(5)移植：将生根的组培瓶苗移栽到育苗杯中，完成瓶苗从人工控制培养条件给养到幼苗自养的过程，具体方法是：将瓶中的幼苗小心取出，洗净黏在苗上的培养基，移植到填满基质的育苗杯中，每一杯种植一株苗，移植覆土深度刚好盖住根系，不超过1厘米，压紧基质，使苗根和基质紧密接触，移植完成后淋透定苗水；(6)幼苗培育：瓶苗在移植后保持基质湿润，空气相对湿度在95％以上，防止叶片失水，之后逐步控制基质水分，相对湿度控制在80％‑60％，控制培养温度25‑28℃，荫棚用70％的遮光网遮光；在移植后第三天采用0.1％百菌清喷雾消毒灭菌，能有效防止病菌滋生，之后每隔10‑15天喷雾一次；当有新芽萌发、新根长出时，喷施1500倍营养液，根据幼苗生长状况，每隔半个月喷施一次；移植后生长稳定了，长出新芽和新根后，逐步增加光照强度，直到进行全光照常规管理，幼苗培育至15厘米高时，移至大一号花盆培育大苗；其中，a.所述MS1培养基为初代培养基，按每1升含以下营养元素的药品种类和质量的比例，溶解于水中配制成，pH调至5.8：加水至1000ml，另外辅加：6‑苄基腺嘌呤0.5‑5.0mg/l，萘乙酸0.01‑0.5mg/l；b.所述MS2培养基为增殖培养基，按每1升含以下营养元素的药品种类和质量的比例，溶解于水中配制成，pH调至5.8：加水至1000ml，另外辅加：6‑苄基腺嘌呤0.2‑2.0mg/l，3‑吲哚丁酸0.01‑0.5mg/l；c.所述MS3培养基为诱导生根培养基，按每1升含以下营养元素的药品种类和质量的比例，溶解于水中配制成，pH调至5.8：加水至1000ml，另外辅加：3‑吲哚丁酸0.2‑2.0mg/l，萘乙酸0.05‑0.8mg/l。