一种检测胎膜早破免疫层析试纸的制备方法

摘要

本发明公开一种免疫层析试纸的制备方法，具体涉及一种检测胎膜早破免疫层析试纸的制备方法。所述制备方法主要通过调整其层析膜、胶体金、胶体金结合物等的制备方法来实施。本发明制备方法制备所得的检测胎膜早破免疫层析试纸的灵敏性和特异性有较明显的提高，分别可达到97%以上和93%以上，从而减少误诊的发生率。

主权项

一种检测胎膜早破免疫层析试纸的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括有以下步骤：A、羊抗人可溶性细胞间粘附分子‑1多克隆抗体作为检测线的工作液，羊抗鼠IgG多克隆抗体作为质控线的工作液；检测线工作液浓度为2.5mg/mL，质控线工作液浓度为1.5mg/mL，将所述检测线工作液和质控线工作液在硝酸纤维素膜上进行包被，所得硝酸纤维素膜在38℃下干燥10小时得层析膜；B、将0.005g‑0.03g/100mL的氯金酸水溶液加热至沸，搅拌下加入浓度为2g/mL的柠檬酸三钠水溶液2.5mL，煮沸3‑10分钟，冷却后用浓度为0.1‑0.3mol/L的K₂CO₃水溶液调节pH值至6.0‑7.0得胶体金；所得胶体金中加入鼠抗人可溶性细胞间粘附分子‑1单克隆抗体标记20‑50min后，加入牛血清白蛋白封闭20‑50min后离心分离，所得离心产物为胶体金结合物；将所得胶体金结合物溶于pH7.2‑7.4的磷酸盐缓冲液中，所述磷酸盐缓冲液中含有20mg/100mL的叠氮钠；将加入了胶体金结合物的磷酸盐缓冲液包被在玻璃纤维上，于36‑38℃干燥8‑12小时得胶体金结合垫；该步骤中加入的鼠抗人可溶性细胞间粘附分子‑1单克隆抗体的量占胶体金的比例为150‑180μg/mL；该步骤中加入的牛血清白蛋白的量占胶体金的比例为150‑200mg/100mL；C、将A和B步骤所得的层析膜和胶体金结合垫按照样品垫、胶体金结合垫、层析膜、吸水垫的顺序依次粘贴在胶板上制备得所述检测胎膜早破免疫层析试纸；该步骤中样品垫为采用以下方法制备而成：将玻璃纤维浸泡于pH7.2‑7.4的磷酸盐缓冲液中2‑6小时后，于36‑38℃干燥8‑12小时得样品垫；该步骤中磷酸盐缓冲液中还含有0.5‑3.0mL/100mL的Triton‑X100和0.5‑2g/100mL的BSA。