一种通过同源重组敲除ura5基因的高山被孢霉尿嘧啶营养缺陷型及其构建方法

摘要

本发明涉及一种高山被孢霉（Mortierella alpinaATCC32222）的尿嘧啶营养缺陷型菌株及其构建方法。本发明采用高山被孢霉ATCC32222为材料，运用根癌农杆菌介导的遗传操作技术进基因敲除，得到一株高山被孢霉尿嘧啶营养缺陷型，对产油真菌高山被孢霉ATCC32222的基础理论研究及产品开发具有重要的意义。

主权项

一种制备高山被孢霉尿嘧啶营养缺陷型菌株的方法，所述菌株是通过失活Mortierella alpinaATCC 32222基因组中编码乳清酸磷酸核糖转移酶OPRTase的ura5基因构建而成的，所述ura5基因的失活是通过缺失654bp的ura5基因中的213bp‑230bp共18bp的序列而实现的，其特征在于所述方法是通过同源重组使高山被孢霉ura5基因中的213bp‑230bp共18bp序列缺失从而使ura5基因失活，所使用的同源臂分别是ura5基因上游‑1180至+212的1393bp和下游+231至+1592的1362bp的片段，具体步骤为：首先获得ura5敲除基因片段，并进一步构建敲除质粒pBIG4KOura5，然后用重组质粒pBIG4KOura5转化根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens C58C1，最后用经转化的含质粒pBIG4KOura5的根癌农杆菌转化高山被孢霉并对转化后的高山被孢霉进行筛选和鉴定，获得尿嘧啶营养缺陷型菌株。