一种真菌荧光染色的方法及应用

摘要

一种真菌荧光染色的方法，该方法包括直接将染色液（将直接黄96溶于0.1M的Tris–HCl缓冲液（pH=8.5）中）均匀喷雾在寄主植物叶片表面，以观察病原真菌孢子于寄主植物叶片表面的情况；还包括将病原真菌菌丝侵蚀的叶片浸入沸水浴的95%体积浓度的乙醇中以完全脱除叶绿素；取出叶片，依次用50%体积浓度的乙醇、50mM氢氧化钠、纯水清洗，最后将叶片浸入染色液中染色，以观察病原真菌侵入到寄主叶组织后的情况。如此，由于本方法所用试剂均无毒无害，比起常规脱色方法中用到的氯仿、苯酚、三氯乙酸、吡啶等试剂而言更加安全环保；且本操作方法简单易行，在不影响染色效果的前提下，不仅省略了切片的过程，染色的步骤也大为简化。

主权项

一种真菌荧光染色的方法，其特征在于，该方法包括：寄主植物表面病原真菌孢子入侵寄主叶组织前的染色：将染色液均匀喷雾在有病原真菌侵蚀的寄主植物叶片表面；病原真菌菌丝侵入寄主叶组织后的染色：将病原真菌菌丝侵蚀的叶片浸入沸水浴的脱色液中，直至叶片中的叶绿素完全脱除；取出叶片，用50%体积浓度的乙醇清洗2‑3次，每次10‑15分钟，然后用50mM氢氧化钠清洗2‑3次，每次10‑15分钟，接着用纯水清洗2‑3次，每次10‑15分钟，最后将叶片浸入染色液中染色5‑8min；上述脱色液是95%体积浓度的乙醇；上述染色液是将2mg直接黄96溶于100mL 0.1M 的pH值为8.5的Tris–HCl缓冲液中配制而成。