一种草莓基因组DNA的提取方法

摘要

本发明涉及分子生物学技术领域，公开了一种草莓基因组DNA的提取方法，用液氮将样品麿成粉末，加入CTAB提取液，55～65℃水浴后冷却至室温，加入醋酸钾后冰浴，再加入等体积的氯仿/异戊醇混合液，混匀，离心，再在所得上清液中加入等体积的氯仿/异戊醇混合液，混匀、静置、离心分离得上清液；在上清液中加入异丙醇后，离心得沉淀物；离心后去除上清液，加入含RNase的TE缓冲液在37℃水浴，然后加入等体积的氯仿/异戊醇混合液，混匀、静置、离心分离得上清液，向上清液中加入醋酸钠和无水乙醇后，离心去除上清液，向沉淀中加入TE缓冲液溶解沉淀，即为草莓基因组DNA溶液。本发明综合了CTAB和SDS提取方法的特点，最终得到高糖多酚类植物草莓高质量的基因组DNA。

主权项

一种草莓基因组DNA的提取方法，其特征在于：包括以下步骤，(1)将CTAB提取液预热到55～65℃，每1g草莓果实或叶片粉末中加入5～10ml预热后的CTAB提取液，在55～65℃下保温30～60分钟，其间晃动3～4次使其混合，得到混合物Ⅰ；(2)将步骤(1)中的混合物Ⅰ中加入5M的醋酸钾溶液，加入醋酸钾溶液的体积为步骤(1)中CTAB提取液体积的1/4～1/3，冰浴条件下放置1‑2h，得到混合物Ⅱ；(3)再加入氯仿/异戊醇混合液，加入的氯仿/异戊醇混合液与混合物Ⅱ等体积；混合后在2‑5℃离心，收集上清液；在上清液中加入与上清液等体积的氯仿/异戊醇混合液，在2‑5℃离心；重复步骤(3)中操作，直至上清液中无杂质为止，得到中间相Ⅰ；(4)向步骤(3)所得的中间相Ⅰ中加入异丙醇，加入异丙醇的体积为中间相Ⅰ体积的2/3，产生絮状沉淀，离心得到沉淀物；(5)向步骤(4)中得到的沉淀物中加入含40～100μg/ml核糖核酸酶的TE缓冲液，然后在37℃的水浴中反应30～60min，得到混合物Ⅱ；(6)向混合物Ⅱ中加入混合物Ⅱ等体积的氯仿/异戊醇混合液，在2‑5℃离心，取上清液；向上清液中加入与上清液等体积的氯仿/异戊醇混合液，在2‑5℃离心，重复步骤(6)中操作，直至上清液中中无杂质为止，得到中间相Ⅱ；(7)取步骤(6)所得的中间相Ⅱ，加入3M醋酸钠和乙醇，加入醋酸钠的体积为中间相Ⅱ体积的1/10，加入乙醇的体积为中间相Ⅱ体积的2倍；‑20℃放置30～60min，然后在2‑5℃离心，收集沉淀物；(8)向步骤(7)所得的沉淀物中加入TE缓冲液，溶解后即得草莓基因组DNA。