一种基于生物芯片快速检测PP65的方法

摘要

本发明公开了适配子在制备检测人巨细胞病毒PP65蛋白的生物芯片中的应用，属于分子生物学领域。本发明利用与PP65具有特异性的适配子，应用生物芯片技术检测HCMV PP65抗原，并优化相关试剂体系及建立相应操作流程，提高了PP65检验效率。针对传统检测方法检测时间长、受临床应用限制、检测费用高等问题，采用生物芯片快速检测PP65，能在早期预测HCMV病。本发明具有流程少、操作简单、检测时间短、便于普及等优点，可为自动化检验提供理论及实践基础。

主权项

适配子在制备检测人巨细胞病毒PP65蛋白的生物芯片中的应用，应用方法包括以下步骤：(1)取两张晶芯基因芯片，用Binding buffer将100ng FITC绿色荧光标记PP65巨细胞病毒抗体稀释至100μL，并加入等体积的DMSO，然后点样于基因芯片中央，37℃孵育10～14小时；(2)取出玻片，用Washing buffer清洗3～5次，加入80～100μL 0.1～0.3％BSA封闭12小时以上；(3)取出玻片，用Washing buffer清洗3～5次，加入待检样品，37℃孵育10～14小时；(4)用Washing buffer清洗3～5次，加入1～3μM HEX红色荧光标记的与人巨细胞病毒PP65抗原具有特异性的适配子，37℃孵育10～14小时，所述适配子为SEQ ID No.1～SEQ ID No.6的序列之一；(5)用Washing buffer清洗3～5次，荧光显微镜下观察；如果待检样品中有PP65抗原，则在显微镜下既能看到红色荧光又能看到绿色荧光；如果待检样品中没有PP65抗原，则在显微镜下只能看到红色荧光，不能看到绿色荧光。