一种新型细胞因子融合蛋白IP10单链抗体的制备方法

摘要

本发明公开了一种新型细胞因子融合蛋白——趋化因子干扰素诱导蛋白10单链抗体的制备方法，包括以下步骤：S1、合成人源性IP10胞外端基因；S2、利用重组噬菌体抗体系统构建抗表皮生长因子受体突变体III（EGFRvIII）的单链抗体；S3、对(Gly₄Ser)₃柔性接头进行优化合成；S4、将IP10和抗EGFRvIII单链抗体依次克隆于真核表达载体中，并通过优化的(Gly₄Ser)₃柔性接头连接，获得IP10-scFv基因；S5、将该基因在大肠杆菌中高效表达，获得生物学活性的IP10-scFv。本发明的IP10-scFv具有更高的抗原-抗体结合率，临床上可以减少IP10用量，降低其毒副作用，进而还可以减少胶质瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）过继输入的数量和提高CTL活性。

主权项

一种新型细胞因子融合蛋白IP10单链抗体的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：S1、根据基因库合成人源性IP10胞外端编码基因；S2、利用重组噬菌体抗体系统构建抗表皮生长因子受体突变体III的单链抗体，并测定其基因序列；S3、对(Gly₄Ser)₃柔性接头进行胸腺嘧啶‑腺嘌呤序列替换部分鸟嘌呤‑胞嘧啶序列的优化合成，并克隆于真核表达载体中；其中，用TA序列替换了5组GC序列，替换后的(Gly₄Ser)₃柔性接头序列为：GGCGGTGTAGTAAGCGTAGGAGGCGGAATAGGAGTAGGAGGAAGC；S4、将所述IP10胞外端编码基因和抗表皮生长因子受体突变体III的单链抗体基因依次克隆于所述真核表达载体中，并通过所述优化合成的(Gly₄Ser)₃柔性接头相连接，获得IP10单链抗体的编码基因；S5、将所述IP10单链抗体的编码基因亚克隆于pET28a载体质粒，并在大肠杆菌中表达，进一步通过体外蛋白复性获得生物学活性的IP10单链抗体。