一种真菌病毒双链RNA快速提取试剂盒及其应用

摘要

本发明具体涉及一种真菌病毒双链RNA快速提取试剂盒及应用。包含细胞裂解液、核酸吸附液、核酸洗涤液和双链RNA琼脂糖凝胶电泳试剂。采用新的缓冲溶液系统，以硅膜替代纤维素粉作吸附介质，无需苯酚等有机试剂，通过细胞裂解液和核酸吸附液的反应将蛋白质及绝大部分DNA、多糖等杂质以化学沉淀方式除去，最后通过乙醇调整吸附条件使双链RNA有效结合于硅膜上并洗脱得到纯化的双链RNA。可从低至0.3克菌丝样品中制备高质量双链RNA。整个提取过程在1小时内。本发明省去了传统方法中有机试剂抽提及吸取上清的步骤，涉及过柱等操作均以离心方式完成，适用于大量样品的高通量处理。

主权项

包含下列试剂组合物的试剂盒在快速提取真菌病毒双链RNA中的应用，其特征在于所述的试剂盒由下列试剂组成：：(1)细胞裂解液：a.按重量/体积计十二烷基硫酸钠2％；b.按重量/体积计聚乙烯吡咯烷酮‑40 4％；c.氯化钠0.5mol/L；d.pH 8.0的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐50mmol/L；e.pH 8.0的乙二胺四乙酸钠25mmol/L；f.按体积/体积计巯基乙醇1％；(2)核酸吸附液：a.按重量/体积计异硫氰酸胍50％；b.氯化钾1.5mol/L；c.氯化铵0.5mol/L；d.pH 5.9的乙酸钠100mmol/L；(3)双链RNA吸附介质：含硅膜的微量吸附柱；(4)核酸洗涤液：a.按重量/体积计异硫氰酸胍50％；b.氯化钠1.5mol/L；c.pH 5.6的乙酸钾50mmol/L；d.按体积/体积计乙醇37％；(5)双链RNA琼脂糖电泳试剂：a.TAE：2M三羟甲基氨基甲烷，1M醋酸，100mmol/L乙二胺四乙酸二钠；b.S1核酸酶500U；c.DNA酶I 1000U；d.DNA分子量标记1.5ml；e.6倍上样缓冲液pH8.0。