口服热淋清颗粒后大鼠尿液和粪便中化学成分测定

摘要

本发明公开了一种口服热淋清颗粒后大鼠尿液和粪便中两种成分的确定及其含量测定方法，含量测定方法是采用高效液相色谱质谱联用检测方法，在所建立的检测方法下对口服热淋清颗粒后尿液和粪便中两种成分没食子酸和原儿茶酸进行含量测定。本发明含量测定方法的精密度高，重现性好，稳定性好，测定结果准确，可对有效评价热淋清颗粒中的没食子酸和原儿茶酸在生物体内的排泄情况。

主权项

大鼠口服热淋清颗粒后尿液和粪便中两种成分的测定方法，其包括以下步骤：(1)尿液测试样品的制备：(a)取热淋清颗粒0.5~4g，加5~10倍水溶解，通过灌胃给药方式给予体重为230‑270g的大鼠热淋清颗粒水溶液10mL/kg；(b)在0~48h采集大鼠尿液，记录尿量，将尿液样品3000~5000r/min转速离心5~30min后，取上层液转移至新空白EP管中；(c)加入内标岩白菜素母液10μL，然后用乙酸乙酯萃取，上层液与乙酸乙酯的体积比为1：4~1:8，萃取时间2~5min，涡旋混匀30~60s后，在0~10℃恒温下以10000~12000r/min离心5~15min；(d)上层液转移至新空白EP管中，于30~50℃氮气流吹干，残留物用100μL流动相溶解，涡旋混匀30~60s后，在0~10℃恒温下以10000~12000r/min离心5~15min，取上清液即为尿液供试品溶液；(e)按步骤(b)至步骤(d)的方法对未服用药物的空白尿液进行处理，得到尿液空白溶液；(2)粪便测试样品的制备：(a)取热淋清颗粒0.5~4g，加5~10倍水溶解，通过灌胃给药方式给予体重为230‑270g的大鼠热淋清颗粒水溶液10ml/kg；(b)收集48h内大鼠粪便，将大鼠粪便烘干，称重，取0.1~1g样品加入5~10倍量水制成混悬液，将样品3000~5000r/min转速离心5~30min后，取上层液转移至新空白EP管中；(c)加入内标岩白菜素母液10μL，然后用乙酸乙酯萃取，上层液与乙酸乙酯的体积比为1：4~1:8，萃取时间2~5min，涡旋混匀30~60s后，在0~10℃恒温下以10000~12000r/min离心5~15min；(d)上层液转移至新空白EP管中，于30~50℃氮气流吹干，残留物用100μL流动相溶解，涡旋混匀30~60s后，在0~10℃恒温下以10000~12000r/min离心5~15min，取上清液即为粪便供试品溶液；(e)按步骤(b)至步骤(d)的方法对未服用药物的空白粪便进行处理，得到粪便空白溶液；(3)LC‑MS/MS分析的色谱条件和检测条件：对照品溶液的制备：分别精密称取没食子酸对照品、原儿茶酸对照品、岩白菜素对照品0.01~1mg，各自加纯甲醇定容至10ml，即得三种母液，分别取三种母液适量至同一量瓶中，加甲醇稀释至所需浓度，即为对照品溶液；色谱柱为反相C18色谱柱，所述色谱柱规格为2.1×150 mm，填料粒径为1.7μm；以含0.1%甲酸的乙腈A：含0.1%甲酸的水B为流动相，按以下条件梯度洗脱：0 ~ 3 min 2%A, 3.0 ~3.1 min 2%A~10%A, 3.1 ~10.0 min 10%A, 10.0 ~10.1 min 10%~2%A，10.1 ~17.0min 2%A；流速为0.1~0.5 mL/min，柱温为20~40℃，离子化方式为电喷雾条件，负离子模式监测，喷雾电压为2000~3000V，雾化温度为300~500℃，鞘气压力为30~50mTorr，辅助气压力为5~15mTorr，毛细管温度为200~400℃；(4)测定法：分别精密吸取对照品溶液、尿液空白溶液、粪便空白溶液、尿液供试品溶液、粪便供试品溶液5~20μL，注入高效液相色谱‑质谱联用仪，测定，即得。