一种从大豆乳清中分离纯化大豆凝集素的方法

摘要

本发明涉及一种从大豆乳清中分离纯化大豆凝集素的方法，属于农产品加工及副产品综合利用领域。本发明方法包括以下步骤：（1）大豆乳清的预处理；（2）大豆乳清蛋白的初级分离；（3）大豆乳清蛋白与聚阴离子多糖复凝聚；（4）回收大豆凝集素。原料经预处理、初级分离后复凝聚得到终蛋白多糖复合物；所得终蛋白多糖复合物经超滤除糖，二次离心后即得含有纯化大豆凝集素的蛋白溶液，该蛋白溶液经过真空冷冻干燥得到大豆凝集素高纯度样品。本发明对大豆乳清综合利用，设备要求低，操作简单，无环境污染。且大豆凝集素回收率高，纯度高，蛋白活性高，仍然保持天然的生理活性。

主权项

一种从大豆乳清中分离纯化大豆凝集素的方法，其特征在于步骤如下：（1）大豆乳清的预处理：将大豆乳清调至pH 4.5‑4.8，9500rpm离心30min，除沉淀；再次调至pH 8.0‑10.0，9500rpm离心30min，收集上清液，即得大豆乳清液；用pH调节剂调节pH；（2）大豆乳清蛋白的初级分离：取步骤（1）所得大豆乳清液，调节pH至4.5，在4‑30℃下加入硫酸铵至终饱和度为50%，9500rpm离心30min，收集沉淀，继续向上清中添加硫酸铵至饱和度60%‑80%，9500rpm离心30min，收集沉淀；合并两次沉淀，加入去离子水溶解，使沉淀的质量浓度为1%‑10%，截留分子量3500透析脱盐36‑72h，截留液用真空冷冻干燥仪进行干燥，制得含有大豆凝集素和β‑淀粉酶的P‑7S蛋白；（3）大豆乳清蛋白与聚阴离子多糖复凝聚：将步骤（2）制备的P‑7S蛋白，用去离子水配制终浓度为0.1%‑0.4%的P‑7S大豆乳清蛋白液，调节pH至7.0，待用；配制0.1%‑0.4%的聚阴离子多糖溶液，调节pH至7.0；向P‑7S大豆乳清蛋白液中缓慢加入按P‑7S大豆乳清蛋白液体积计2.5%‑8%的聚阴离子多糖溶液，调节pH至5.0‑4.5，4000rpm离心20min，收集沉淀；对上清液再次重复沉淀1次，合并沉淀物，即得大豆凝集素与聚阴离子多糖的复合物；（4）回收大豆凝集素：将步骤（3）所得大豆凝集素与聚阴离子多糖的复合物悬浮于2‑3倍体积的去离子水中，调节pH至7.0‑9.0，过超滤膜除糖，收集滤过液；截留分子量3000‑4000超滤脱盐，截留液用真空冷冻干燥仪进行干燥，即得纯化的大豆凝集素。