一种犬瘟热和犬细小病毒双色荧光定量PCR检测试剂盒

摘要

本发明公开了一种犬瘟热和犬细小病毒的双色荧光定量PCR检测试剂盒，其中检测方法为：先利用本发明试剂盒的核酸提取液对样本进行预处理并提取核酸，然后用双色荧光定量PCR试剂盒在一个反应体系中同时对犬瘟热和犬细小病毒的核酸进行检测，只需一步检测便可判断待测样品中是否存在犬瘟热、犬细小两种病毒，以及对病毒拷贝数进行定量。该检测方法检测效率高、特异性和敏感性较好，能够满足动物疫病临床检测和疫情监控的目的。

主权项

一种犬瘟热和犬细小病毒双色荧光定量PCR检测试剂盒，包括如下成分：病毒RNA核酸提取液、病毒DNA核酸提取液、反转录酶系、Taq酶系、双色荧光定量PCR MIX、阳性质控品、阴性质控品和DEPC水，其特征在于：所述双色荧光定量PCR MIX中含有10×双色荧光定量PCR buffer、dNTPs、及犬瘟热病毒和犬细小病毒的特异性引物及双色探针，序列分别为：犬瘟热病毒：上游引物：CDV‑F：5’‑ GCAAGCGAGGATTGAGGGTAT‑3’；下游引物：CDV‑R：5’‑ GGCCTATGGGACACACTCAAA‑3’； 荧光探针：CDV‑P：5’‑FAM‑ CACCGACCATCCAGACGTTGCTCCT‑TAMRA‑3’；犬细小病毒：上游引物：CPV‑F：5’‑ CGTCTACACAAGGGCCATTTA‑3’；   下游引物：CPV‑R：5’‑ CCATGTTGTCTACCAAATGCAT‑3’；荧光探针：CPV‑P：5’‑VIC‑ CGCAAACAGATGAAAATCAAGCAGCA‑TAMRA‑3’；犬瘟热病毒的荧光探针报告基团为FAM，犬细小病毒的荧光探针报告基团为VIC，淬灭基团为TAMRA；所述病毒RNA核酸提取液每1000mL中含有：异硫氰酸胍480g，0.1M pH 6.4 的Tris‑HCl 500mL，0.2M pH8.0的EDTA 120mL，余量为水；所述病毒DNA核酸提取液含有20mM NaOH、10mM pH8.0的Tris‑HCl、浓度为2%(w/v) 的Chelex‑100、余量为水。