一种大鼠乳腺上皮细胞原代培养的方法

摘要

本发明提供了一种大鼠乳腺上皮细胞原代培养的方法，通过将大鼠乳腺组织小块消化后，将离心沉淀细胞洗涤、重悬、吹散以及过滤处理后，再将细胞经多次瞬时离心，将沉淀细胞制备为悬液，将悬液的乳腺上皮细胞调整密度后接种培养。本发明步骤简单，经过3小时的酶消化便可获得大量活力较高的细胞；此外，本发明极大程度的降低了成纤维污染，经角蛋白和酪蛋白检测结果显示本发明获得的乳腺上皮细胞纯度高且具备良好的分泌功能。

主权项

一种大鼠乳腺上皮细胞原代培养的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)采集大鼠乳腺组织，将大鼠乳腺组织预处理后剪碎为1mm³大小的大鼠乳腺组织小块，将所述组织小块悬浮于消化液中，在37℃消化3h；(2)消化结束后，离心取细胞沉淀，用含10％胎牛血清的培养液洗涤3次以去除脂肪，将细胞重悬于培养液中，吹散细胞，经100目网筛过滤以去除未消化的组织和碎片；(3)细胞经多次瞬时离心，弃去上清，向沉淀的上皮细胞中加入DMEM/F12培养液制备成细胞悬液；(4)将悬浮的乳腺上皮细胞密度调至5×10⁵mL^‑1，以每孔2mL接种于六孔板或每孔100μL接种于96孔板中，置37℃、5％CO₂条件下培养，48h后第1次换液，去除未贴壁的红细胞和碎片，以后每3d换液1次。