一种托桂型菊花花器性状关联分子标记筛选方法及应用

摘要

本发明属于生物技术领域，提供一种托桂型菊花花器特性QTL分子标记筛选方法，该种方法可用于托桂型菊花花器性状优良基因的定位和克隆及托桂型菊花新品种的培育。包括：1.试验材料及其表型数据的获得；2.菊花连锁图谱构建；3.结合表型数据和分子遗传图谱，进行托桂型菊花花器性状的QTL分析；4.托桂型菊花花器性状关联分子标记的确定。本发明以托桂型秋菊品种“QX-053”为母本和非托桂型秋菊品种“南农惊艳”为父本杂交获得的160株F₁分离群体为试材，获得了多个与托桂型菊花花器性状显著关联的分子标记。托桂型菊花花器性状关联分子标记的获得，可用于托桂型菊花花器性状的优良基因的精细定位和克隆，大大提高选择效率，从而加快托桂型菊花育种进程。

主权项

一种托桂型菊花花器性状关联分子标记的筛选方法，其特征在于：该方法包括如下步骤： 1)试验材料及其表型数据的获得： 试验材料为保存于南京农业大学“中国菊花种质资源保存中心”的菊花品种；第一年选择花器表型差异明显的托桂型和非托桂型秋菊品种进行人工杂交，获得F₁杂交种子，次年3月初经穴盘点播，连同亲本扦插苗于4月中下旬各株系标号后定植于菊花圃地，常规管理同大田；分别于第二年和第三年秋季生殖生长初期调查双亲与F₁代植株的花器相关性状，每个株系5个单株重复，每个单株调查1个花序，并计算两年性状调查的平均值；利用Microsoft Excel 2007软件和SPSS 18.0软件对两个年份的花器相关性状的表型数据分别进行基本描述性数统计分析； 2)菊花连锁图谱构建： ①提取亲本及其F₁杂交后代基因组DNA； ②利用亲本和8—10个杂交F₁代单株对SRAP和SSR引物组合进行多态性筛选，将筛选出的多态性引物组合用于F₁代作图群体的多态性扩增并统计扩增后的多态性条带数据； ③采用Joinmap 3.0软件的‘CP作图模型’，设置LOD≥3.0，分别对双亲的分离位点进行连锁分析，将重组率转换成遗传距离，获得双亲的分子标记连锁群，根据连锁分析结果制作连锁遗传图谱； 3)托桂型菊花花器性状的QTL定位： 结合表型数据和连锁遗传图谱，运用复合区间作图法进行托桂型菊花花器性状的QTL分析，绘制QTL分布图，并估算各QTL的加性效应及其对表型变异的贡献率； 4)菊花花器性状关联分子标记的确定： 根据步骤3)所得的主效QTL所在的标记区间即可确定与托桂型菊花花器性状紧密关联的分子标记。