一种酵母葡聚糖中非水溶性葡聚糖含量的检测方法

摘要

本发明涉及一种酵母葡聚糖中具有生物活性的非水溶性葡聚糖含量的检测方法，主要步骤包括：顺次经过除去碱溶性杂质、除去酸溶性杂质、浓酸降解、稀酸水解，先将酵母葡聚糖中的水溶性葡聚糖和杂质除去，再将非水溶性葡聚糖完全转化为水溶性葡聚糖，用苯酚-硫酸法测定非水溶性葡聚糖的含量。本发明能将酵母葡聚糖中的非水溶性葡聚糖完全转化为水溶性葡聚糖，从而用苯酚-硫酸法测定非水溶性葡聚糖的含量，本发明具有可操作性强、测量结果准确度高、相对标准偏差小、重现性好等优点，为酵母葡聚糖中非水溶性葡聚糖含量的定量检测提供了依据。

主权项

一种酵母葡聚糖中非水溶性葡聚糖含量的检测方法，其特征在于：主要步骤包括：顺次经过除去碱溶性成分、去除酸溶性成分、浓酸降解和稀酸水解，将非水溶性葡聚糖完全转化为水溶性葡聚糖，用苯酚‑硫酸法测定非水溶性葡聚糖的含量；具体步骤包括：(1)除去碱溶性成分取烘干粉碎的待测多糖样品，分别称取20‑200mg于3‑5个离心杯中，分别加入碱溶液，充分震荡5‑10min，离心5‑20min，弃去上清液，如此重复2次；(2)去除酸溶性成分向步骤(1)中弃去上清液的3‑5个离心杯中，分别加入酸溶液，充分震荡5‑10min，离心5‑20min，弃去上清液，如此重复2次；(3)浓酸降解将步骤(2)中弃去上清液的3‑5个离心杯中的沉淀分别转移到相应的100mL碘量瓶中，分别向各个碘量瓶加入酸溶液，充分震荡2‑5min，室温放置20‑30min；(4)稀酸水解向经步骤(3)酸处理后的3‑5个碘量瓶中分别加入40mL‑80mL水，接上冷凝管，100℃水解2‑6小时，取出，冷水浴中降温到室温，分别转移到100mL容量瓶中，并定容得待测样品溶液；(5)苯酚‑硫酸法测定非水溶葡聚糖的含量配制50g/L的苯酚溶液：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100mL，混匀，置冰箱中保存，备用；配制葡聚糖标准储备溶液：精密称取分子量10000、干燥至恒重的葡聚糖标准品P820.5000g，加水溶解，并定容至50mL，混匀，置冰箱中保存；配制葡聚糖标准溶液：吸取葡聚糖标准储备溶液1.00mL，置于100mL容量瓶中，加水至刻度，混匀，置冰箱中保存；标准曲线绘制：精密吸取葡聚糖标准溶液0，0.10，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00mL分别置于25mL比色管中，准确补充水至2.0mL，加入50g/L的苯酚溶液1.0mL，在旋转混匀器上混匀，小心加入浓硫酸10.0mL，于旋转混匀器上小心混匀，置沸水浴中煮沸10min，冷却后用分光光度计在490nm波长处以试剂空白溶液为参比，1cm比色皿测定吸光度值；以葡聚糖的质量浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，得出标准曲线的回归方程为：Y＝4.405X‑0.0031，R²＝0.9997式中Y为葡聚糖的质量浓度，单位为mg/mL，X为吸光度值，R为线性相关系数；测定非水溶葡聚糖的含量：吸取步骤(4)所得的待测样品溶液5‑25mL，用蒸馏水稀释至50‑500mL，吸取该稀释液1mL‑2mL，分别加入3‑5个25mL比色管中，依次加入蒸馏水补至总体积2mL，再分别加入50g/L的苯酚溶液1.0mL，混合均匀后，加入10mL浓硫酸，然后迅速放入沸水浴中10‑30min，再用冰水浴迅速冷却至室温，摇匀，以空白样品为参比，在490nm波长下，根据标准曲线得出样品溶液中非水溶葡聚糖的质量，从而按照下式获得样品中非水溶葡聚糖的含量：$x=\frac{w_1}{m\times \frac{v_2}{v_1}\times \frac{v_4}{v_3}}\times 100\%$式中：x—样品中非水溶葡聚糖的含量；w₁—测定样品溶液中非水溶葡聚糖的质量，mg；m—多糖样品的质量，mg；v₁—样品稀酸水解中定容总体积，mL；v₂—吸取的待测样品溶液的体积，mL；v₃—吸取的待测样品溶液稀释后的体积，mL；v₄—测定用样品溶液体积，mL；所述步骤(1)中碱溶液为氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液或其混合物；所述步骤(1)中碱溶液的体积为10mL‑30mL，浓度为20g/L‑100g/L；所述步骤(2)中酸溶液为盐酸溶液或硫酸溶液或其混合物；所述步骤(2)中酸溶液的体积为10mL‑20mL，浓度为20ml/L‑40ml/L；所述步骤(3)中酸溶液为10mL、8‑10moL/L的硫酸溶液。