一种通用型PiggyBac转座子转基因载体及其制备方法

摘要

本发明公开了一种通用型PiggyBac转座子转基因载体及其制备方法，包括供体载体和辅助载体；所述的供体载体包括PiggyBac转座子5’重复末端序列5’TR和3’重复末端序列3’TR，在5’TR和3’TR之间设有两个绝缘子，在绝缘子序列之间设有多克隆位点；所述的辅助载体包括PiggyBac转座酶编码基因Pbase，在Pbase的上游设有启动子，在其下游设有PloyA。将外源基因克隆至供体载体的多克隆位点中，然后再与辅助载体混合转染细胞，稳定筛选细胞单克隆，通过PB转座子元件将外源基因特异性整合到基因组中的TTAA位点。

主权项

1.一种通用型PiggyBac转座子转基因载体，其特征在于，包括供体载体和辅助载体；所述的供体载体包括PiggyBac转座子5’重复末端序列5’TR和3’重复末端序列3’TR，在5’TR和3’TR之间设有两个绝缘子，在绝缘子序列之间设有多克隆位点；所述的5’TR的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示；3’TR的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.2所示；靠近5’TR的绝缘子与多克隆位点之间还设有相互连接的抗生素筛选基因和荧光标记基因；所述的抗生素筛选基因和荧光标记基因的两端分别设有两个同向的Loxp序列：Loxp1和Loxp2；在Loxp1与抗生素筛选基因之间还设有SV40PloyA，抗生素筛选基因与荧光标记基因通过2A序列连接，荧光标记基因与Loxp2之间还设有CMV启动子；所述2A序列为：cctaacgccggagaagaagaagggcccagggttggactcaacgtctcctgccaacttgagaaggtcaaaatt；所述的绝缘子的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.4所示，所述的多克隆位点的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.3所示；所述的辅助载体包括PiggyBac转座酶编码基因Pbase，在Pbase的上游设有启动子，在其下游设有PloyA。