一种制备可降解载药涂层支架的方法

摘要

本发明公开了一种制备可降解载药涂层支架的方法，具体方法为：第一步、预处理；第二步、将第一步中制备的冻干物溶于三羟甲基氨基甲烷缓冲液中；第三步、钢片的包被；第四步、包被金黄色葡萄球菌A蛋白；第五步、进行封闭，本发明的有益效果：本发明提供的可降解载药涂层支架制备方法解决了目前应用的药物涂层支架中存在的诸多问题，采用本发明提供的制备方法所制取的药物涂层耐冲刷、涂层均匀、稳定、体外捕获内皮组细胞能力强，可以达到很好的抑制血栓形成及降低再狭窄的目的，具有重要的临床应用价值。

主权项

一种制备可降解载药涂层支架的方法，其特征在于：其具体方法如下所述：第一步、预处理：先用抛光机将钢片抛光至镜面，然后将抛光后的钢片用去污粉清洗，之后分别用丙酮、乙醇超声清洗，最后用去离子水超声清洗；然后制备多巴胺和肝素缩合形成的化合物的冻干物；钢片及冻干物紫外线灭菌；三羟甲基氨基甲烷缓冲液的配置：Tris碱0.121加80ml Milli‑Q水溶解，用1M盐酸调节PH值为8.5，定容至100ml，验证PH值，灭菌，肝素钠溶液配置：3mg/ml肝素钠的Milli‑Q水溶液100ml，用0.1M NaOH及1％醋酸调节pH值为4.2，配好的肝素钠溶液，灭菌；第二步、将第一步中制备的冻干物溶于三羟甲基氨基甲烷缓冲液中，配好的溶液中保证多巴胺浓度为4mg/ml；取48孔板，每孔中放置配置好的溶液，用镊子每孔放1枚钢片，结束钢片上多巴胺的聚合反应：将钢片自溶液中取出，置于新的48孔板中，Milli‑Q水清洗，清洗后氮气吹干；第三步、钢片的包被：将第二步中制得的钢片进行血管内皮生长因子和肝素的包被，包被层数为1‑10层；具体包被过程为：将血管内皮生长因子溶于pH值为7.4的PBS缓冲液中，配置成100ug/ml溶液，将制得的钢片浸入血管内皮生长因子溶液中，4℃条件下反应，12小时后取出钢片，去离子水冲洗，氮气吹干，制得的钢片表面生成有血管内皮生长因子层，血管内皮生长因子的等电点为8.5，通过调节pH值能够使血管内皮生长因子溶液和肝素钠溶液分别带正电、负电，然后一层肝素一层血管内皮生长因子再一层肝素这样层层静电吸附直至所需层数；第四步、包被金黄色葡萄球菌A蛋白：将金黄色葡萄球菌A蛋白中加入PBS，配置成1mg/ml溶液，再进行稀释，最终配置成0.1mg/ml金黄色葡萄球菌A蛋白溶液，将上步中获得的支架置于金黄色葡萄球菌A蛋白溶液中，4℃冰箱中静置24小时，将钢片取出用pH值为7.4的PBS溶液清洗3次，氮气吹干；第五步、进行封闭：将上步中被金黄色葡萄球菌A蛋白包被后的支架浸入10mg/ml牛血清白蛋白中，4℃下静置封闭，取出用PBS清洗，氮气吹干，然后配置CD34抗体溶液，将封闭后的支架浸入CD34抗体溶液中，4℃条件下反应12小时，取出用PBS清洗，常温干燥；进一步，进行CD34抗体的荧光标记和表征：包被抗体CD34的支架中取一枚进行荧光标记，之前用兔血清封闭，异硫氰酸荧光素标记鼠抗兔IgG抗体配置成混合溶液，将包被抗体CD34的支架与标记物37℃条件下共浴1小时，常温下过夜干燥，固定于载玻片上，送检免疫荧光。