一种定量检测TRECs和KRECs基因的实时荧光定量PCR试剂盒以及应用

摘要

本发明涉及一种用于定量检测TRECs和KRECs基因实时荧光定量PCR检测试剂盒及其应用。本发明包括一个以巢式PCR技术为基础的PCR反应体系和以实时荧光PCR技术为基础的实时荧光定量(Realtime)PCR反应体系。其中巢式PCR反应体系包括针对TRECs、KRECs和β-actin基因的正、反向引物；荧光PCR反应体系包括针对TRECs、KRECs和β-actin基因的正、反向引物和特异性荧光探针。该试剂盒可以快速地联合筛查新生儿免疫系统T细胞水平和B细胞水平，具有高灵敏度和稳定性，以及非常好的重现性，此方法适用于TRECs和KRECs的联合定量检测，能应用于新生儿免疫系统功能筛查，具有实际的临床应用价值。

主权项

一种定量检测TRECs和KRECs基因的实时荧光定量PCR试剂盒，其中包括DNA提取液、巢式PCR反应液、包含TRECs基因插入序列的标准品I、包含KRECs基因插入序列的标准品II、包含β‑actin基因插入序列的标准品III、包含TRECs基因的实时荧光引物和探针的荧光PCR反应液I、包含KRECs基因的实时荧光引物和探针的荧光PCR反应液II和包含β‑actin基因的实时荧光引物和探针的荧光PCR反应液III，其中，所述的巢式PCR反应液包括：1)巢式PCR扩增TRECs基因的正向引物，其碱基序列如SEQ NO:1所示；2)巢式PCR扩增TRECs基因的反向引物，其碱基序列如SEQ NO:2所示；3)巢式PCR扩增KRECs基因的正向引物，其碱基序列如SEQ NO:3所示；4)巢式PCR扩增KRECs基因的反向引物，其碱基序列如SEQ NO:4所示；5)巢式PCR扩增β‑actin基因的正向引物，其碱基序列如SEQ NO:5所示；6)巢式PCR扩增β‑actin基因的反向引物，其碱基序列如SEQ NO:6所示，所述的荧光PCR反应液I包括：1)实时荧光PCR检测TRECs基因的正向引物，其碱基序列如SEQ NO:7所示；2)实时荧光PCR检测TRECs基因的反向引物，其碱基序列如SEQ NO:8所示；3)用于检测TRECs基因的探针，其碱基序列如SEQ NO:9所示；其中所述的荧光PCR反应液II包括：1)实时荧光PCR检测KRECs基因的正向引物，其碱基序列如SEQ NO:10所示；2)实时荧光PCR检测KRECs基因的反向引物，其碱基序列如SEQ NO:11所示；3)用于检测KRECs基因的探针，其碱基序列如SEQ NO:12所示；所述的荧光PCR反应液III包括：1)实时荧光PCR检测β‑actin基因的正向引物，其碱基序列如SEQ NO:13所示；2)实时荧光PCR检测β‑actin基因的反向引物，其碱基序列如SEQ NO:14所示；3)用于检测β‑actin基因的探针，其碱基序列如SEQ NO:15所示。