猪白细胞干扰素的制备方法

摘要

本发明属于生物制剂技术领域，尤其涉及一种猪白细胞干扰素的制备方法,通过加入明胶生理盐水分层、离心、重悬沉淀，加入氯化铵溶液离心后培养，加入新城疫病毒NDVⅡ旋转培养，再通过NaOH、Hcl调整PH值，离心去除沉淀后制得猪白细胞干扰素粗制液，将猪白细胞干扰素粗制液先加入灭菌的硫氰酸钾溶解后再进行酸化处理，离心后的沉淀物用雾化法加入乙醇溶液，离心去除沉淀调节PH值后依次加入NaAc、KCNS离心沉淀，将沉淀物加入PBS溶解透析，即制得精制的猪白细胞干扰素，本发明制得的猪白细胞干扰素活性较高，通过氯化铵溶液裂解使白细胞纯度大大提高，NaAc使干扰素提纯效果更好，活性回收率更高，同时提高了干扰素的整体产量，降低了干扰素的生产成本。

主权项

一种猪白细胞干扰素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1）、将无菌方法采集的新鲜抗凝血加入到等体积30g/L的明胶生理盐水中，混合均匀后静置在37℃恒温箱中，至分层清楚，取上层液以3000rpm离心15min，弃上清液，重悬沉淀；  步骤2）、取步骤1收集的沉淀按照体积比1：1加入质量体积浓度0.83%的氯化铵溶液，混合均匀后以3000rpm离心15min，取第一次离心后的沉淀再次按照1：1的比例加入0.83%的氯化铵溶液，混合均匀后以3000rpm离心15min，将二次离心后的沉淀用Hanks液洗涤三遍，加入原全血液1～1.5倍体积量的含5％猪血清的Eagle’s MEM混合培养液悬浮，根据细胞计数的结果进行稀释，将猪白细胞数控制在1×10⁷个/ml～5×10⁷个/ml之间；  步骤3）、在已稀释好的每毫升细胞悬液中加入含100个活性单位的猪白细胞干扰素，置于37℃水浴摇床搅拌培养3h；步骤4）、按照每毫升猪白细胞悬液40～80HA NDVⅡ的加入量，在细胞悬液中加入一定量新城疫病毒NDVⅡ，于水浴恒温振荡器37℃旋转培养24h，培养时分别在2h~3h、6h~7h期间加入1  MNaOH溶液将 pH控制在7.3～7.4，培养完成后，用6M Hcl把培养液pH调至3.5，在4℃下酸化处理4d，再用质量体积浓度6%的 NaOH溶液把pH调至7.4，离心去除沉淀，上清液即为猪白细胞干扰素粗制液；步骤5）、取步骤4制得的猪白细胞干扰素粗制液样品作无菌、余毒检查试验，阴性者置低温冰箱储存备用。