以黄皮属植物中的咔唑生物碱为抗肿瘤活性成分的药物组合物及其制备方法与应用

摘要

以咔唑生物碱clausine D（1）、6-methoxyheptaphylline（2）、mafaicheenamine C（3）或claulansine G（4）为活性成分的药物组合物。它们的制备方法，它们在制备肿瘤细胞生长抑制剂中的应用，以及在制备抗肿瘤药物中的应用。

主权项

制备如下结构式所示的黄皮属植物中的咔唑生物碱clausine D(1)、6‑methoxyheptaphylline(2)、mafaicheenamine C(3)、claulansine G(4)的方法，取黄皮的根茎，经干燥、粉碎后，用甲醇回流提取3次，时间为每次4小时，提取液经减压浓缩得甲醇浸膏；将甲醇浸膏加水混悬后，依次用乙酸乙酯和正丁醇充分萃取，等体积各萃取三次，回收溶剂得到乙酸乙酯部分、正丁醇部分和水部分；将乙酸乙酯部分经硅胶柱层析，用100:0,95:5,90:10的氯仿/甲醇梯度洗脱，薄层层析，结合TLC检测方法，根据咔唑生物碱极性的不同合并为七个组分Fr.1‑Fr.7；以下的每一步骤都须结合TLC检测方法来进行分离纯化，Fr.2用60目的聚酰胺拌样，以甲醇和水做流动相经中压MCI柱层析10％‑100％梯度洗脱除去色素，然后硅胶柱层析，用9:1‑7:3石油醚/乙酸乙酯为洗脱剂梯度洗脱分离得到四个亚组分Fr.2‑1‑Fr.2‑4；Fr.2‑2再经硅胶柱层析以9:1‑7:3石油醚/乙酸乙酯为洗脱剂梯度洗脱分离得到四个亚组分Fr.2‑2‑1‑Fr.2‑2‑4；Fr.2‑2‑1经两次硅胶柱层析，以9:1‑7:3石油醚/乙酸乙酯为洗脱剂梯度洗脱除去一部分杂质，得到的样品浓缩后再经Waters OBD制备柱60％乙腈/水等度洗脱纯化，纯化出来的样品浓缩后再以丙酮为溶剂重结晶得到化合物6‑methoxyheptaphylline(2)；Fr.6经硅胶柱层析，以9:1‑7:3石油醚/丙酮为洗脱剂梯度洗脱初步除去色素，然后再经中压MCI柱层析，以10％‑60％甲醇/水为流动相梯度洗脱进一步除去色素，然后再用中压RP‑18柱层析，以5％‑70％甲醇/水为流动相梯度洗脱得到四个亚组分Fr.6‑1‑Fr.6‑4；Fr.6‑1经硅胶柱层析，以20:1氯仿/丙酮为洗脱剂等度洗脱进一步分离得到三个亚组分Fr.6‑1‑1‑Fr.6‑1‑3；Fr.6‑1‑1经Sephadex LH‑20层析，1:1的氯仿/甲醇为洗脱剂等度洗脱得到的样品浓缩后再经硅胶柱层析，以9:1石油醚/丙酮为洗脱剂等度洗脱分离得到化合物claulansine G(4)；Fr.6‑1‑2经硅胶柱层析，以20:1氯仿/乙酸乙酯为洗脱剂等度洗脱分离得到含有生物碱的样品，再经Waters OBD制备柱，以48％的乙腈/含0.6％的三氟乙酸的水为洗脱剂等度洗脱得到化合物mafaicheenamine C(3)；Fr.6‑3经硅胶柱层析，以9:1石油醚/丙酮为洗脱剂等度洗脱得到含有生物碱的样品，该样品以丙酮为溶剂重结晶得到化合物clausine D(1)。