从去白细胞滤器里分离淋巴细胞的方法

摘要

本发明提供了一种从去白细胞滤器里分离淋巴细胞的方法，包括以下步骤：获取PBS、白细胞和部分血液的混合液；弃去血浆，向弃去血浆的细胞混合液中加入磷酸缓冲液，小心混匀形成混合液；将混合液小心叠加于细胞分离液上离心，收集第二层细胞放入磷酸缓冲液中，充分混匀后，离心，弃去上清留沉淀,然后重复洗涤,最后沉淀得到所分离的外周血单个核细胞；将所分离的外周血单个核细胞培养于37℃，5％CO₂培养箱，过夜培养后，收集悬浮的淋巴细胞。本发明提供的从去白细胞滤器中分离淋巴细胞的方法，不仅可以避免淋巴细胞的浪费，而且对红细胞，血小板等其它成分不会造成影响，用此分离方法得到的淋巴细胞数量可达1×10⁶，存活率大于90％。

主权项

一种从去白细胞滤器里分离淋巴细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：取去白细胞滤器，过滤全血后，白细胞残留在滤器中；步骤二：使用磷酸缓冲液冲洗去白细胞滤器，获得磷酸缓冲液、白细胞和部分血液的混合液；步骤三：将磷酸缓冲液、白细胞和部分血液的混合液离心弃去血浆；步骤四：向弃去血浆的细胞混合液中加入磷酸缓冲液，小心混匀形成混合液；步骤五：将混合液小心叠加于细胞分离液上离心，此时离心管中由上向下分为四层：第一层为血浆层；第二层为环状乳白色单个核细胞层；第三层为透明分离液层；第四层为红细胞层；收集第二层细胞放入含磷酸缓冲液的试管中，充分混匀后，离心，弃去上清留沉淀,然后重复洗涤,最后沉淀得到所分离的外周血单个核细胞；步骤六：将所分离的外周血单个核细胞培养于37℃，5％CO₂培养箱，过夜培养后，收集悬浮的淋巴细胞。