主权项 |
一种用蜜蜂LOC409360基因检测蜂王浆产量的方法,其特征在于,鉴别方法如下: (1)蜜蜂取样:从被考察蜂群中,每群分别采集30只哺育蜂;所述哺育蜂指蜂群中哺育幼虫的工蜂,即6-12日龄的工蜂;(2) 蜜蜂头部RNA提取及cDNA合成:提取所采集哺育蜂头部的RNA,反转录获得cDNA;(3)引物设计:设计合成引物Primer‑F和 Primer‑R,Primer‑F的序列如SEQ ID NO.3所示,Primer‑R 的序列如SEQ ID NO.4所示;(4)荧光定量PCR检测:以稀释后的蜜蜂头部cDNA为模板, 以Primer‑F和 Primer‑R为引物,进行荧光定量PCR;选用蜜蜂头部的GAPDH为内参基因,采用2<b><sup>‑</sup></b><sup>△△ct</sup> 方法计算蜜蜂LOC409360基因的表达量;在每个蜂群样本的每次qRT‑PCR反应中均重复多次,取多次重复的平均值为蜜蜂LOC409360基因的最终表达量,最终表达量越高,则該蜂群的蜂王浆产量性能越好;所述2<sup>‑</sup><sup>△△ct</sup>为蜜蜂LOC409360基因的相对表达量,其中△△Ct = (Ct<sub>target</sub>‑Ct<sub>GAPDH</sub>) <sub>treatment </sub>‑ (Ct<sub>target</sub>‑Ct<sub>GAPDH</sub>) <sub>control</sub>。 |