探针：反义探针组合物对高特异性DNA或RNA的检测

摘要

相互作用并标记的多核苷酸探针和反义探针和/或互补的靶探针，为我们提供了用于扩增或检测核酸的组合物及方法。这些组分的竞争性热力相互作用导致显示靶频率的信号变化，并且可以提供促成单碱基识别错误的检查功能。这些探针、反探针组合物能进行实时荧光定量PCR检测，终点检测和微生物的微阵列检测，耐药突变和癌症相关的变异。一些探针、反义探针在两个引物之间作为内部探针，一些作为引物探针。采用两个探针：反义探针系统检测同一模板的不同方面，以辨别或量化一些靶序列。还提供了增强靶扩增和检测特定单碱基变异的系统。探针也可通过引入一个碱基不匹配以增加相差一个碱基的正确与不正确的靶的热力学识别力而修饰。

主权项

一种选择性地检测靶核苷酸序列的系统，所述系统包括至少一种探针：反义探针系统，其包括：(a)包括与第一靶核苷酸序列互补的核苷酸序列的探针寡核苷酸，以及与其连接的第一标记部分；和(b)包括除了在非末端位置至少一个不匹配的碱基外与所述探针寡核苷酸完全互补的核苷酸序列的反义探针寡核苷酸，和第二标记部分，其中，所述第二标记部分连接到所述反义探针寡核苷酸或者是所述反义探针寡核苷酸的区域，其中：(i)该探针寡核苷酸被配置为对第一靶核苷酸序列的杂交亲和力高于对所述反义探针寡核苷酸的杂交亲和力；所述反义探针寡核苷酸被配置为对所述探针寡核苷酸的杂交亲和力高于对感兴趣的第二靶核苷酸序列的杂交亲和力；(ii)在第一靶核苷酸序列存在时，所述探针寡核苷酸和所述第一靶核苷酸序列形成双链，由此所述第一和第二标记部分不发生相互作用，从而提供了第一可检测信号；(iii)在所述第一靶核苷酸序列不存在时，该探针寡核苷酸和反义探针寡核苷酸形成双链，从而允许所述第一和第二标记部分发生相互作用以提供经调制的可检测信号，其中所述第一可检测信号和所述经调制的可检测信号是可区分的；及(iv)在与所述第一靶序列相差至少一个碱基不匹配的第二靶核苷酸序列存在时，探针寡核苷酸和反义探针寡核苷酸优先形成双链，由此抑制所述探针寡核苷酸与第二靶核苷酸序列形成双链。