一种基于数字PCR平台检测基因点突变的方法和试剂盒

摘要

本发明涉及分子生物学领域，具体为一种检测基因点突变的方法及试剂盒；以数字PCR为平台，在反应体系中加入PCR引物和TaqMan探针，利用两条标记不同类型荧光的TaqMan探针对野生和突变DNA模板进行检测；根据荧光类型判断样品中DNA模板的类型及其数量和比例。

主权项

一种基于数字PCR平台检测基因点突变的方法，其特征在于，（1）数字PCR混合液制备：将待测的DNA模板、PCR引物、TaqMan探针以及PCR预混液混合，制备得到数字PCR混合液；所述的TaqMan探针包括与突变型DNA模板结合的TaqMan探针，或者，包括与突变型DNA模板结合的TaqMan探针以及与野生型DNA模板结合的TaqMan探针；所述与突变型DNA模板结合的TaqMan探针以及与野生型DNA模板结合的TaqMan探针为连接荧光基团和猝灭基团的核苷酸，且两者所含的荧光基团不同；（2）用数字PCR混合液制作PCR微反应液滴，再进行PCR扩增反应；PCR扩增条件为：93～97℃预变性3～15分钟；93～97℃变性5～50秒，65～75℃退火5～50秒，55～65℃延伸10～65秒，共进行20～60个循环，2～10℃终止反应；（3）信号收集与结果判断：对PCR扩增反应后的产物进行信号收集，根据荧光信号的类型判断待测样品中是否含有点突变的DNA模板及其数量和含量。