运用SYBR Green I荧光染料进行特异性DNA检测的试纸条技术

摘要

本发明提供一种运用SYBR Green I荧光染料在试纸条上进行特异性DNA快速检测的技术，它包括以下步骤：选择尼龙膜作为试纸条的材料；将探针点到尼龙膜上，探针为待检测的特异性核苷酸序列，然后紫外线照射，烘烤，黑暗干燥储存；以待测样本为模板、以探针为模板设计的引物为引物，进行PCR扩增，之后94℃变性10min，立即放4℃，得到待测序列；缓冲液冲洗尼龙膜，在尼龙膜上点杂交液，其中杂交液中包含SYBR Green I和待测序列，室温黑暗杂交，用缓冲液、去离子水顺次清洗尼龙膜，用488-nm激光的成像扫描仪成像，根据尼龙膜是否发光判定结果。该方法简单﹑廉价﹑快速、适用于临床快速诊断。

主权项

一种运用SYBR Green I荧光染料进行特异性DNA检测的试纸条技术，其特征在于包括以下步骤：（1）选择尼龙膜作为试纸条的材料；（2）将探针点到尼龙膜上，所述探针为待检测的特异性核苷酸序列，然后用紫外线对尼龙膜进行照射，然后烘烤，最后黑暗干燥储存；（3）运用普通PCR技术，以待测样本为模板、以探针为模板设计的一对引物为引物进行PCR扩增，扩增完之后再94℃变性10min，然后立即放4℃，得到待测序列；（4）使用缓冲液冲洗固定了探针的尼龙膜，然后在尼龙膜上点上杂交液，其中杂交液中包含SYBR Green I和步骤（3）得到的待测序列，室温黑暗杂交，接着用缓冲液、去离子水顺次清洗尼龙膜，最后用488‑nm激光的成像扫描仪对湿润的尼龙膜成像，根据尼龙膜是否发出绿色荧光判定结果的阴阳性。